酶联免【miǎn】疫试剂盒是较普遍【biàn】常用的药物残【cán】留检测方法，与仪器分析【xī】技术相比具有【yǒu】快速、简便、准确和灵敏度高等特点，但【dàn】对【duì】实验【yàn】操作条件的要求比较严【yán】格【gé】。实验条件主要由实验室的【de】操作【zuò】环境【jìng】和操作人员的操【cāo】作熟练程【chéng】度两方【fāng】面组成，但ELISA试剂盒对【duì】实验室操作【zuò】环境的【de】要【yào】求是【shì】几种药物残留【liú】检【jiǎn】测方法中相对较低的。由于大部分的试验操作【zuò】步骤都是由实验人员来完成的，人为【wéi】的【de】误差相对严重一些。本人结【jié】合几【jǐ】年的工作实践介【jiè】绍一下进【jìn】行ELISA操作的【de】时候应该【gāi】注意【yì】的问题。

 酶联免疫试剂盒操作的通用的规则
1 .要确保微量加样器的准确【què】性，可以使用蒸馏水和电子【zǐ】天平进【jìn】行确定【dìng】(由于【yú】蒸馏水不含杂质，温度环【huán】境为20％左【zuǒ】右时，lmL的【de】水【shuǐ】可以【yǐ】看作【zuò】是lg、200 L的水可【kě】以看作是0．2g)每一把【bǎ】微量加样器都应该将其高量程和zui低【dī】量程进行确【què】定。
2. 在使用微【wēi】量加样器时【shí】，吸取不【bú】同瓶【píng】子【zǐ】中液体后要更换枪头，即使吸取标准品【pǐn】溶液【yè】。
3. 吸取液体时速度不易太【tài】快，以【yǐ】免【miǎn】产生气泡【pào】，吸取的【de】量不够准确。
4. 将【jiāng】液体加【jiā】到酶标孔中时，避免枪头和【hé】孔内液体接触，可使枪头上【shàng】的液滴和孑L壁【bì】接触【chù】，液滴会自然流【liú】下【xià】去。吸入液体时【shí】的【de】的方法是吸两档打一档，防止【zhǐ】由于枪【qiāng】头的毛细作用【yòng】使得【dé】部分液体不能【néng】流出而造成的误差。
5. 吸取液体时要选用量程和【hé】需要【yào】量接近的微【wēi】量加【jiā】样器【qì】吸，减【jiǎn】少误差。
6 .液体【tǐ】全部【bù】加入酶标孔后【hòu】，将酶标板放在桌【zhuō】子上平行轻轻摇晃30s，使液体充分混【hún】合均匀，也使【shǐ】其【qí】得到充分的反【fǎn】应。
7. 孵【fū】育时要使【shǐ】盖板膜【mó】封好酶标板，防止水【shuǐ】分【fèn】蒸发，以防曲线不成线【xiàn】性。
8 .实验前30min将试剂【jì】盒中的所有试剂从冰箱【xiāng】取出【chū】，使试【shì】剂【jì】盒中的【de】所有【yǒu】试剂与提取好的样【yàng】品溶液的温【wēn】度相同，酶标板只【zhī】要取出所需量【liàng】。
9. 由于底物显色剂对光及其敏感，因此要避光保存。
10 .手工洗板时【shí】每次加入洗涤液后。应静置15～30s，不要将一个酶标孑【jié】L中的【de】洗涤【dí】液溅【jiàn】入另一酶标孔中，防止【zhǐ】交【jiāo】叉污染。甩去洗涤液后将酶标【biāo】板【bǎn】放在毛巾【jīn】或吸水【shuǐ】纸上拍干【gàn】。
11 .检测吸光度前应将酶标仪打开，将其预热30min以上。
12. 底【dǐ】物为TMB，避【bì】免与皮【pí】肤相接触【chù】。终止液【yè】为2tool的浓硫酸具有【yǒu】腐蚀性，应尽量避免接【jiē】触皮【pí】肤
13 .孵育的时间应该严格按照试剂盒说明书上的时间为准。
14 .要尽量做【zuò】双【shuāng】孔实【shí】验，这【zhè】样才既能保【bǎo】证数据的准确性，又能反映出试【shì】剂盒【hé】的精密度。
15. 对样本的结果有疑问时需要使用其他检测方法进行验证。
16 .没【méi】有去离子【zǐ】水或双蒸水时，可以使用【yòng】娃哈哈纯净【jìng】水【shuǐ】配【pèi】制溶【róng】液，切勿使用自来水。