Elisa试【shì】剂盒以灵敏【mǐn】度较高、特异性【xìng】较好的特点【diǎn】在上得到了广泛的应用，然而实【shí】验【yàn】新【xīn】手们【men】面【miàn】对各种各样、动则上上千种【zhǒng】的Elisa试剂盒，内心应该是崩溃的。

Elisa试剂盒的操作

(一)检验方法

1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。

2.取所【suǒ】需用量酶标板条【tiáo】，设空白对【duì】照1孔、阴【yīn】性/阳性对照各2孔，未【wèi】用的板【bǎn】条尽快【kuài】密封，2～8℃保存。

3.空【kōng】白对【duì】照孔加样【yàng】品稀释液100μl；阴【yīn】、阳性【xìng】对照孔分别【bié】加入阴、阳【yáng】性对照100μl；样品孔每孔【kǒng】加【jiā】入稀释后的样【yàng】品100μl。

4.混匀，置37℃反应30分钟。

5.扣去孔内液体，每孔加【jiā】满洗【xǐ】涤液，静置30秒后弃【qì】去，重复洗涤5次，拍【pāi】干。

6.每孔加酶标记物100μl(空白孔除外)。置37℃反应30分钟。

7.洗涤，同步骤5。

8.每孔依【yī】次加底物液【yè】A、底【dǐ】物液【yè】B各50μl，混匀，37℃避光反应【yīng】10分钟。

9.每孔加终【zhōng】止【zhǐ】液50μl，混匀，用空白孔【kǒng】调零，于450nm(可【kě】用630nm作参比波长)测定各孔吸光值(A值)。

(二)样品准备

1.取动物全血按常规方法【fǎ】制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染【rǎn】。样品1周【zhōu】内可于【yú】2～8℃保【bǎo】存，长【zhǎng】期需置-20℃保【bǎo】存。

2.用样品稀释液将待检血清按100倍稀释(如2μl血清加入198μl样品稀释液中，混匀)。阴、阳性对照不用稀释。

3.浓缩洗【xǐ】涤液【yè】使用前【qián】应恢复至室温【wēn】使沉【chén】淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水【shuǐ】作20倍稀【xī】释。

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