动物细胞培养的必需条件:
在所【suǒ】有的【de】细胞【bāo】离体培【péi】养中,最困难【nán】的是动物【wù】细胞培养。下面是它所【suǒ】需要的特殊条件。
⑴血【xuè】清:动【dòng】物【wù】细胞离体培养常常需要血清。常【cháng】用的【de】是小牛血清。血【xuè】清提供生长必需因【yīn】子,如激素、微【wēi】量【liàng】元【yuán】素、矿物质和脂肪。在这里,血【xuè】清【qīng】等于是【shì】动物细胞离体培养的天然营养【yǎng】液。
⑵支持【chí】物:大多数动物细胞有贴壁生长的【de】习惯。离体培养常用玻【bō】璃【lí】,塑料等作为【wéi】支【zhī】持【chí】物。
⑶气体交换【huàn】:二氧化【huà】碳和氧【yǎng】气的比例要在细胞培养过【guò】程【chéng】中不断进【jìn】行调【diào】节,不断【duàn】维持所需要的【de】气体条件。
动物细胞培养的培养步骤:
注【zhù】:所有【yǒu】步骤应在无菌【jun1】无毒的【de】超净工作台进【jìn】行。蛋白酶处理时间不宜过长。
取【qǔ】离体的【de】动物组织,器【qì】官或细胞,剪碎并【bìng】加入yi蛋白酶分【fèn】解成单个【gè】细胞,配置形成细胞悬【xuán】液。
制备动物【wù】细胞培养【yǎng】液体培养基【jī】(需【xū】加入血清,保证无菌无毒),将细【xì】胞接种至培养基,放入【rù】二氧化碳【tàn】培养箱中【zhōng】进【jìn】行初代培养。
当细胞增殖达到【dào】一【yī】定程度,出现接【jiē】触抑制现象时【shí】,用yi蛋白【bái】酶再次处理,并用细胞悬液【yè】吹打贴【tiē】壁生长的细胞。进【jìn】行细胞计【jì】数【shù】。
依照计数结果,分瓶培养,进行传代培养。获得细胞系或细胞株。