弓形杆菌属通用PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：弓形杆菌属通用PCR检测试剂盒

英文名称：Arcobacter spp.PCR

准备物品：

清理液【yè】（A）                                   毫【háo】升

染色液【yè】（t B）                                 微【wēi】升

稀【xī】释液（C）                                   毫升【shēng】

溶解【jiě】液（tD）                                  毫【háo】升

产品说明【míng】书                                     1份

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应的物质【zhì】主要有五种【zhǒng】即引物、酶、dNTP、模【mó】板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，弓形杆菌属通用PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性取决于引物与模板【bǎn】DNA互补的程度。理论上，只要知道任【rèn】何【hé】一段模板DNA序列【liè】， 就能按其设计【jì】互补的寡核苷【gān】酸链做引物【wù】，利【lì】用PCR就可【kě】将模板DNA在体外【wài】大量扩增。设计引物应【yīng】遵【zūn】循以【yǐ】下原【yuán】则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增【zēng】跨度【dù】： 以【yǐ】200-500bp为宜【yí】，特定【dìng】条件【jiàn】下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基【jī】：G+C含量以9-21%为宜【yí】，G+C太少【shǎo】扩增效果不佳，G+C过多易出现【xiàn】非特异【yì】条带。ATGC*随机分布，避免【miǎn】5个以上的嘌呤或【huò】嘧啶【dìng】核苷酸的成串排【pái】列。

④避免引物内部【bù】出现二【èr】级结构，避免两条【tiáo】引物间互补，特【tè】别是3'端的互补【bǔ】，否则会形成引【yǐn】物二聚体，产生【shēng】非特异【yì】的扩增条【tiáo】带。

⑤引物3'端【duān】的碱基，特别是末及倒数第【dì】二个碱【jiǎn】基，应严格【gé】要求配【pèi】对，以避免因末端碱【jiǎn】基不【bú】配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上【shàng】合适的酶切位点， 被扩增的靶序列【liè】*有适【shì】宜的酶切【qiē】位【wèi】点【diǎn】， 这对酶切分析【xī】或【huò】分子克隆很有【yǒu】好处。

⑦引物的特异性：引【yǐn】物应【yīng】与【yǔ】核酸序列【liè】数据库【kù】的其它序列【liè】无明显同源性。

引物【wù】量：每条引物的【de】浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所【suǒ】需【xū】要的结果为好，引物浓度【dù】偏高会引起错配和非特异性扩【kuò】增，且可增加引物【wù】之【zhī】间【jiān】形【xíng】成【chéng】二聚体的机会【huì】。