莫氏立克次氏体PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：莫氏立克次氏体PCR检测试剂盒

英文名称：Rickettsia mooseriPCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫【háo】升

染色液【yè】（t B）                                 微【wēi】升

稀释液【yè】（C）                                   毫升

溶解液【yè】（tD）                                  毫升

产品说明书【shū】                                     1份【fèn】

注意事项：

1．基础程序。

2．扩增温度和延伸温度。

3．反应时间。

4．循环次数。

5．PCR 反应液的配制。

6．PCR技术的基本原理。

7．PCR的反应动力学。

8．PCR扩增产物。

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参【cān】加PCR反应【yīng】的物质【zhì】主【zhǔ】要【yào】有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，莫氏立克次氏体PCR检测试剂盒PCR 产物【wù】的特异【yì】性取决于引物与模板DNA互【hù】补的程度。理论上，只要知【zhī】道任何一【yī】段模【mó】板DNA序列【liè】， 就能按其【qí】设计【jì】互补的寡核苷酸【suān】链做引【yǐn】物，利用PCR就可将模板DNA在体外【wài】大量扩增。设计引物应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以【yǐ】200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至【zhì】10kb的【de】片段【duàn】。

③引【yǐn】物碱基：G+C含量以9-21%为宜【yí】，G+C太【tài】少扩增效果不佳，G+C过多【duō】易出【chū】现非特【tè】异条带。ATGC*随机分【fèn】布【bù】，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷【gān】酸【suān】的【de】成【chéng】串排列。

④避免【miǎn】引物内部出现二级结构，避【bì】免两条【tiáo】引物【wù】间互补，特别是3'端【duān】的互补，否【fǒu】则会形成引物二聚体【tǐ】，产生非【fēi】特【tè】异的扩增条带【dài】。

⑤引物【wù】3'端的【de】碱基，特别是末及【jí】倒数第二个碱【jiǎn】基，应严格要求配对，以避免因【yīn】末端碱基不配【pèi】对而【ér】导致PCR失败。

⑥引物中【zhōng】有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列【liè】*有适【shì】宜的酶切【qiē】位点， 这对酶切分析或分子克【kè】隆很【hěn】有好处。

⑦引物的特异性【xìng】：引【yǐn】物应与核【hé】酸序列数据库【kù】的其它序【xù】列无明显同源性。

引物【wù】量：每条引物的浓度0.1～1umol或【huò】10～100pmol，以*引物量【liàng】产生【shēng】所需要的结【jié】果为好，引物浓度【dù】偏高会引起【qǐ】错【cuò】配和非特异性扩增，且可增加【jiā】引【yǐn】物之【zhī】间形成二【èr】聚体的机会。