蜱传出血热病毒PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：蜱传出血热病毒PCR检测试剂盒

英【yīng】文【wén】名称：Tickborne Hemorrhagic Fever Virus(TBHFV)RTPCR

准备物品：

清【qīng】理液【yè】（A）                                   毫升

染色液（t B）                                 微【wēi】升

稀释液（C）                                   毫【háo】升

溶解液【yè】（tD）                                  毫【háo】升

产【chǎn】品说明书【shū】                                    1份

注意事项：

1．基础程序。

2．扩增温度和延伸温度。

3．反应时间。

4．循环次数。

5．PCR 反应液的配制。

6．PCR技术的基本原理。

7．PCR的反应动力学。

8．PCR扩增产物。

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应的【de】物质主要【yào】有五种【zhǒng】即引物、酶、dNTP、模板和【hé】Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，蜱传出血热病毒PCR检测试剂盒PCR 产物的特异【yì】性取决于引物与模【mó】板【bǎn】DNA互补的程度。理论上，只要【yào】知道【dào】任【rèn】何一【yī】段模板DNA序列， 就能按其设计【jì】互补的寡【guǎ】核【hé】苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩【kuò】增。设计引物应遵循以【yǐ】下原则【zé】：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物【wù】扩增跨度： 以200-500bp为宜【yí】，特定【dìng】条件下可扩增【zēng】长至10kb的片段。

③引【yǐn】物碱基：G+C含【hán】量以9-22%为宜【yí】，G+C太少扩增效果不佳，G+C过【guò】多易出现非特异条带。ATGC*随机【jī】分【fèn】布【bù】，避免5个【gè】以【yǐ】上的嘌【piào】呤【lìng】或【huò】嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免【miǎn】引物内【nèi】部出【chū】现二级结构，避免两【liǎng】条引物间互补【bǔ】，特【tè】别【bié】是3'端【duān】的互补，否则会形成引物【wù】二聚体，产生非特异的扩增条【tiáo】带。

⑤引【yǐn】物3'端的碱基【jī】，特别是末及倒数第【dì】二个碱基，应严格【gé】要求配对，以避免【miǎn】因末端碱基不【bú】配对【duì】而导致【zhì】PCR失败。

⑥引物中有或【huò】能加上合【hé】适的酶切位点， 被【bèi】扩增的【de】靶序【xù】列*有适宜的酶【méi】切【qiē】位点， 这对酶切【qiē】分析或分子【zǐ】克隆很有【yǒu】好处。

⑦引物【wù】的【de】特异性：引物应与核酸序列数据库【kù】的其【qí】它序列无明显同【tóng】源性。

引物量【liàng】：每条引物的浓度0.1～1umol或【huò】10～100pmol，以【yǐ】*引物【wù】量产生所需要的结果为好【hǎo】，引物浓度偏高会引【yǐn】起错配和非特异性扩【kuò】增【zēng】，且可增【zēng】加【jiā】引物之间形成【chéng】二聚体的机【jī】会。