美洲四棱线虫PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：美洲四棱线虫PCR检测试剂盒

英文名称：Tetrameres americanaPCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫升【shēng】

染色液【yè】（t B）                                 微【wēi】升

稀释液【yè】（C）                                   毫升【shēng】

溶【róng】解液【yè】（tD）                                  毫升

产品【pǐn】说明书                                     1份

注意事项：

1．基础程序。

2．扩增温度和延伸温度。

3．反应时间。

4．循环次数。

5．PCR 反应液的配制。

6．PCR技术的基本原理。

7．PCR的反应动力学。

8．PCR扩增产物。

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参【cān】加【jiā】PCR反应的物质主要有五【wǔ】种即引【yǐn】物、酶【méi】、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，美洲四棱线虫PCR检测试剂盒PCR 产物的特【tè】异性取决于引物【wù】与模板DNA互【hù】补的程度。理论上，只要知道【dào】任何【hé】一段模【mó】板DNA序【xù】列， 就能按【àn】其【qí】设计互补的【de】寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设【shè】计引物应遵循【xún】以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物【wù】扩增跨度： 以200-500bp为【wéi】宜，特定条件下可扩增长至【zhì】10kb的片段【duàn】。

③引物碱【jiǎn】基：G+C含【hán】量【liàng】以9-21%为宜，G+C太少【shǎo】扩增效果不【bú】佳，G+C过【guò】多【duō】易出现非特【tè】异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌【piào】呤或嘧啶【dìng】核苷酸的成串排列。

④避免【miǎn】引物内部出现【xiàn】二级结构，避免两【liǎng】条引【yǐn】物间互补，特别是3'端的【de】互【hù】补，否则会形成引【yǐn】物二聚【jù】体，产生非特异的扩增条带【dài】。

⑤引物【wù】3'端的碱基，特别是末及倒【dǎo】数第二【èr】个碱基，应严格【gé】要求【qiú】配对，以避免因末端碱基不配对【duì】而导【dǎo】致【zhì】PCR失【shī】败。

⑥引物中有【yǒu】或能加【jiā】上【shàng】合适的酶切位【wèi】点， 被扩【kuò】增的靶序列*有适【shì】宜【yí】的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆【lóng】很有【yǒu】好【hǎo】处。

⑦引物的特异性：引物应【yīng】与核【hé】酸序列【liè】数【shù】据库【kù】的其它序列无明显同源性。

引物量：每条引物【wù】的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量【liàng】产生所需要【yào】的【de】结果【guǒ】为好【hǎo】，引物浓【nóng】度偏高会引【yǐn】起错配和非特异性扩增，且【qiě】可增加引物之间形成二聚体的机会。