溶藻弧菌PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：溶藻弧菌PCR检测试剂盒

英文名称：Vibrio alginolyticusPCR

准备物品：

清理【lǐ】液（A）                                   毫【háo】升

染【rǎn】色液（t B）                                 微升

稀释【shì】液（C）                                   毫升

溶解【jiě】液（tD）                                  毫【háo】升

产品说明书【shū】                                     1份

注意事项：

1．基础程序。

2．扩增温度和延伸温度。

3．反应时间。

4．循环次数。

5．PCR 反应液的配制。

6．PCR技术的基本原理。

7．PCR的反应动力学。

8．PCR扩增产物。

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反【fǎn】应的【de】物质主要【yào】有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，溶藻弧菌PCR检测试剂盒PCR 产【chǎn】物的特异性取决【jué】于引物与【yǔ】模板DNA互补的程度。理论上，只要【yào】知道任何一段模板【bǎn】DNA序列【liè】， 就能按【àn】其设计互补的寡核苷酸【suān】链【liàn】做引物【wù】，利用【yòng】PCR就可【kě】将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增【zēng】跨【kuà】度： 以200-500bp为【wéi】宜，特定条件下可扩增长至10kb的片【piàn】段。

③引物碱基：G+C含量【liàng】以9-23%为宜，G+C太少【shǎo】扩增效果【guǒ】不佳，G+C过多易出现【xiàn】非特异条带【dài】。ATGC*随机【jī】分布，避【bì】免5个以上的嘌呤【lìng】或嘧啶核苷酸的【de】成串【chuàn】排列。

④避免引物内部出【chū】现二级结构，避免两条引物【wù】间互补，特别【bié】是3'端的互补，否则会形【xíng】成引物【wù】二聚体【tǐ】，产生非特【tè】异的扩【kuò】增条带。

⑤引物【wù】3'端的碱基，特别是末及【jí】倒数第二个碱【jiǎn】基，应严格要求配对，以避【bì】免因末端碱基【jī】不配对而导【dǎo】致【zhì】PCR失败。

⑥引物中有或能加上【shàng】合适的酶切位点【diǎn】， 被扩增的靶序列*有适宜的【de】酶切位点， 这对酶切分析或【huò】分【fèn】子【zǐ】克【kè】隆很有好【hǎo】处。

⑦引物的特异【yì】性：引物【wù】应与核酸序列数【shù】据【jù】库的【de】其它序列无明显【xiǎn】同源性。

引物【wù】量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需【xū】要【yào】的结果为好，引物浓【nóng】度偏【piān】高【gāo】会引【yǐn】起【qǐ】错配和【hé】非特异【yì】性扩增，且可增加引物【wù】之间【jiān】形成二聚体的机【jī】会。