肉孢子虫通用PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：肉孢子虫通用PCR检测试剂盒

英文名称：Sarcocystis spp.PCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫升

染色液（t B）                                 微升

稀释液（C）                                   毫升

溶解【jiě】液（tD）                                  毫升【shēng】

产品说明书【shū】                                     1份

注意事项：

1．基础程序。

2．扩增温度和延伸温度。

3．反应时间。

4．循环次数。

5．PCR 反应液的配制。

6．PCR技术的基本原理。

7．PCR的反应动力学。

8．PCR扩增产物。

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参【cān】加PCR反应的物质主要有五【wǔ】种即【jí】引物、酶、dNTP、模板【bǎn】和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，肉孢子虫通用PCR检测试剂盒PCR 产物的特异【yì】性取决【jué】于引物与【yǔ】模板DNA互补的【de】程【chéng】度。理论【lùn】上【shàng】，只要【yào】知道任何【hé】一段模板DNA序列， 就能【néng】按其【qí】设计互补的寡核【hé】苷【gān】酸链做引物，利用PCR就【jiù】可将【jiāng】模板DNA在体外【wài】大量扩增。设计引物应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增【zēng】跨度： 以200-500bp为宜，特定【dìng】条件下【xià】可扩增【zēng】长至10kb的片段。

③引物碱【jiǎn】基：G+C含【hán】量以9-23%为宜，G+C太少扩增效【xiào】果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随【suí】机【jī】分布，避免【miǎn】5个以上的【de】嘌呤或【huò】嘧啶核【hé】苷酸【suān】的【de】成串排列【liè】。

④避免引物内部出现【xiàn】二级结构，避【bì】免【miǎn】两条引【yǐn】物间互补，特别【bié】是3'端的互【hù】补，否则会形【xíng】成引物二【èr】聚体，产生【shēng】非特异的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基，特别是末及倒数【shù】第二个【gè】碱基，应【yīng】严【yán】格要求配对，以避【bì】免因【yīn】末端碱基不配对而【ér】导致PCR失败【bài】。

⑥引物中有或能加上合【hé】适的酶切【qiē】位【wèi】点， 被扩增的靶序【xù】列*有适宜的酶切位【wèi】点， 这对酶切分析或分子克【kè】隆【lóng】很【hěn】有【yǒu】好处。

⑦引【yǐn】物的特异性：引物应与核酸【suān】序列数据库【kù】的其【qí】它序列无明显同源性。

引物量：每条【tiáo】引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引【yǐn】物量产生所需【xū】要的结果【guǒ】为好，引物浓度偏高会引起【qǐ】错【cuò】配和非特异性扩增【zēng】，且可增加引物之间形成二【èr】聚【jù】体【tǐ】的机会【huì】。