拟态弧菌PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：拟态弧菌PCR检测试剂盒

准备物品：

清理液（A）                                   毫【háo】升

染【rǎn】色液（t B）                                 微【wēi】升

稀【xī】释液（C）                                   毫升

溶解液【yè】（tD）                                  毫【háo】升

产品说明书【shū】                                     1份

注意事项：

1．基础程序。

2．扩增温度和延伸温度。

3．反应时间。

4．循环次数。

5．PCR 反应液的配制。

6．PCR技术的基本原理。

7．PCR的反应动力学。

8．PCR扩增产物。

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应的物质主要【yào】有五【wǔ】种即【jí】引物、酶【méi】、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，拟态弧菌PCR检测试剂盒PCR 产【chǎn】物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程【chéng】度。理论上，只要知道任何【hé】一段模板DNA序列， 就能【néng】按其设计互补【bǔ】的寡核苷酸链做【zuò】引物，利用PCR就可【kě】将【jiāng】模板DNA在体外【wài】大【dà】量扩增。设计【jì】引【yǐn】物【wù】应遵【zūn】循以下【xià】原则【zé】：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特【tè】定条件下【xià】可扩增【zēng】长至10kb的片【piàn】段。

③引物碱基：G+C含量以【yǐ】9-21%为宜，G+C太【tài】少扩增效【xiào】果不佳，G+C过多【duō】易出【chū】现非【fēi】特异条带。ATGC*随机分布，避免5个【gè】以上的嘌呤或嘧啶核【hé】苷酸的【de】成【chéng】串排列。

④避免引【yǐn】物内部出现二级结构，避【bì】免两条引物间互补，特别是【shì】3'端的互补，否则【zé】会形成引【yǐn】物二聚【jù】体，产生非特异【yì】的扩增【zēng】条带。

⑤引物3'端的【de】碱基【jī】，特别是末及倒【dǎo】数【shù】第二个碱基，应严格【gé】要求配对，以避免因末【mò】端碱【jiǎn】基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有【yǒu】适宜【yí】的酶【méi】切【qiē】位点， 这对【duì】酶【méi】切【qiē】分析或【huò】分子克隆【lóng】很有好处。

⑦引物的【de】特异性：引物应与核酸序列【liè】数据库的【de】其它序列无明显同源【yuán】性【xìng】。

引物【wù】量：每条引物的【de】浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引【yǐn】物量产生所【suǒ】需要的【de】结果为好【hǎo】，引【yǐn】物浓度偏【piān】高会【huì】引起错配和【hé】非特异性扩增【zēng】，且可增加引物之【zhī】间形成二聚体的机会。