尼泊尔葡萄球菌PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：尼泊尔葡萄球菌PCR检测试剂盒

英【yīng】文【wén】名称：Staphylococcus nepalensisPCR

准备物品：

清理液【yè】（A）                                   毫升

染色液（t B）                                 微升【shēng】

稀释液（C）                                   毫【háo】升

溶解液（tD）                                  毫【háo】升【shēng】

产品说明书【shū】                                     1份

注意事项：

1．基础程序。

2．扩增温度和延伸温度。

3．反应时间。

4．循环次数。

5．PCR 反应液的配制。

6．PCR技术的基本原理。

7．PCR的反应动力学。

8．PCR扩增产物。

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应的物质主要有五【wǔ】种【zhǒng】即引【yǐn】物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，尼泊尔葡萄球菌PCR检测试剂盒PCR 产物的【de】特异【yì】性【xìng】取决于引【yǐn】物与模板【bǎn】DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段【duàn】模板DNA序【xù】列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利【lì】用PCR就可将模板DNA在体【tǐ】外大【dà】量扩增。设计引【yǐn】物应遵循以下原【yuán】则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引【yǐn】物扩【kuò】增跨度【dù】： 以200-500bp为【wéi】宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基：G+C含量以【yǐ】9-21%为宜，G+C太少扩增效果【guǒ】不佳，G+C过多【duō】易【yì】出现非特异【yì】条带。ATGC*随机【jī】分布，避【bì】免5个【gè】以上的嘌呤或嘧【mì】啶【dìng】核苷酸的成串【chuàn】排列。

④避免引物内部出【chū】现【xiàn】二级结【jié】构，避免两条【tiáo】引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形【xíng】成引物二聚体，产【chǎn】生非特异的扩【kuò】增条【tiáo】带。

⑤引【yǐn】物【wù】3'端的碱基，特别是末及倒数第二【èr】个碱【jiǎn】基，应严【yán】格要求配【pèi】对，以【yǐ】避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或【huò】能加上合适的酶切位点【diǎn】， 被扩增的靶序列*有适宜【yí】的酶切位点， 这【zhè】对酶【méi】切分析【xī】或分子克隆【lóng】很有好处。

⑦引物的特异【yì】性：引物应与核酸【suān】序列数据【jù】库的【de】其它序列无明【míng】显同源性【xìng】。

引物量：每条【tiáo】引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好【hǎo】，引物浓度【dù】偏高【gāo】会【huì】引起错配和非特异性扩增【zēng】，且可【kě】增【zēng】加【jiā】引物之间形成二【èr】聚体的机会。