轮状病毒qunPCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：轮状病毒quPCR检测试剂盒

英文名称：Rotavirus A ARTPCR

准备物品：

清【qīng】理液【yè】（A）                                   毫升

染【rǎn】色液【yè】（t B）                                 微升

稀【xī】释【shì】液（C）                                   毫升

溶解液（tD）                                  毫升【shēng】

产【chǎn】品说明书                                     1份

注意事项：

1．基础程序。

2．扩增温度和延伸温度。

3．反应时间。

4．循环次数。

5．PCR 反应液的配制。

6．PCR技术的基本原理。

7．PCR的反应动力学。

8．PCR扩增产物。

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反【fǎn】应的物质主要【yào】有五种即引【yǐn】物、酶、dNTP、模板【bǎn】和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，轮状病毒qunPCR检测试剂盒PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的【de】程度【dù】。理论上，只要【yào】知【zhī】道【dào】任何一段模板DNA序列， 就能【néng】按【àn】其【qí】设计互【hù】补的【de】寡【guǎ】核苷【gān】酸链做引物，利用PCR就【jiù】可将模板DNA在体外大【dà】量扩增。设计【jì】引物应遵【zūn】循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增【zēng】跨【kuà】度： 以200-500bp为宜，特【tè】定条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物【wù】碱【jiǎn】基：G+C含量以【yǐ】9-23%为宜，G+C太少【shǎo】扩增效【xiào】果不佳【jiā】，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上【shàng】的嘌呤或嘧啶核苷【gān】酸的【de】成串排【pái】列。

④避免引物内【nèi】部【bù】出现二级结【jié】构【gòu】，避免【miǎn】两条引【yǐn】物间【jiān】互补，特别是3'端的互补，否【fǒu】则会形成【chéng】引物二聚体，产生非特异的扩增【zēng】条带。

⑤引物3'端的碱基，特别【bié】是末及倒数第二个【gè】碱基【jī】，应严格要【yào】求配对，以避免因末端碱基不配对【duì】而【ér】导致PCR失败。

⑥引物中有【yǒu】或【huò】能加【jiā】上合【hé】适的酶切位点， 被扩【kuò】增的【de】靶序列*有适宜的【de】酶切位点， 这对酶切分析【xī】或分子克隆【lóng】很有好处。

⑦引物【wù】的特【tè】异性：引物应【yīng】与核酸序列数【shù】据库的其它序列无明【míng】显同源【yuán】性。

引物量：每条引物的浓【nóng】度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果【guǒ】为好，引物浓度偏高会引起【qǐ】错【cuò】配【pèi】和【hé】非【fēi】特异【yì】性【xìng】扩【kuò】增，且【qiě】可增加引物之间形成二【èr】聚体【tǐ】的机会。