轮状病毒通用PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：轮状病毒通用PCR检测试剂盒

英文名称：Rotavirus RTPCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫升【shēng】

染色液（t B）                                 微升

稀释液（C）                                   毫升

溶【róng】解液（tD）                                  毫升

产品说【shuō】明书【shū】                                     1份

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应的【de】物质主要有五种【zhǒng】即引物【wù】、酶、dNTP、模板和【hé】Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，轮状病毒通用PCR检测试剂盒PCR 产【chǎn】物的特【tè】异性取决于引物【wù】与模板DNA互【hù】补【bǔ】的程度。理【lǐ】论上，只【zhī】要知【zhī】道【dào】任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计【jì】引物应遵【zūn】循【xún】以下原则【zé】：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩【kuò】增跨度【dù】： 以200-500bp为宜【yí】，特定条件【jiàn】下可扩增长至10kb的片段。

③引物【wù】碱基：G+C含量以9-23%为宜【yí】，G+C太少扩【kuò】增效果不佳【jiā】，G+C过多易出【chū】现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核【hé】苷【gān】酸的成【chéng】串排列【liè】。

④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间【jiān】互补【bǔ】，特【tè】别【bié】是【shì】3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异【yì】的扩增条【tiáo】带【dài】。

⑤引【yǐn】物3'端的碱基，特别【bié】是末及倒【dǎo】数第【dì】二个碱基，应严格要求配【pèi】对【duì】，以避免因末端碱【jiǎn】基不配对而导致PCR失【shī】败。

⑥引物【wù】中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有【yǒu】适【shì】宜的【de】酶切【qiē】位【wèi】点， 这对酶切分【fèn】析或分【fèn】子克隆很有好处。

⑦引物的特异【yì】性：引物应与核酸序列数据库【kù】的【de】其【qí】它【tā】序列【liè】无明显同源性。

引物量【liàng】：每【měi】条引物的浓【nóng】度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要【yào】的结果为好，引物浓度【dù】偏高会引起错配和非【fēi】特异【yì】性扩增，且可增加引物之【zhī】间形成二聚【jù】体的机会。