罗斯河病毒PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：罗斯河病毒PCR检测试剂盒

英【yīng】文名【míng】称：Ross River Virus(RRV)RTPCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫升【shēng】

染【rǎn】色【sè】液（t B）                                 微升

稀【xī】释液【yè】（C）                                   毫升

溶解液【yè】（tD）                                  毫升

产品【pǐn】说明书                                     1份

注意事项：

1．基础程序。

2．扩增温度和延伸温度。

3．反应时间。

4．循环次数。

5．PCR 反应液的配制。

6．PCR技术的基本原理。

7．PCR的反应动力学。

8．PCR扩增产物。

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加【jiā】PCR反应的物质【zhì】主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，罗斯河病毒PCR检测试剂盒PCR 产【chǎn】物的特异性取决【jué】于引物与模板DNA互补的程度【dù】。理论上，只要知道【dào】任何一【yī】段模板DNA序列， 就能按其【qí】设【shè】计互补的【de】寡核苷酸链【liàn】做引【yǐn】物【wù】，利用PCR就可将【jiāng】模板【bǎn】DNA在体外大量扩增。设计引物【wù】应【yīng】遵循以【yǐ】下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引【yǐn】物扩增跨度： 以【yǐ】200-500bp为宜，特定条件下可扩增【zēng】长【zhǎng】至【zhì】10kb的片段【duàn】。

③引物【wù】碱【jiǎn】基：G+C含量以【yǐ】9-22%为【wéi】宜，G+C太少扩增效【xiào】果不佳，G+C过多易【yì】出现非特异条带【dài】。ATGC*随机【jī】分布，避【bì】免5个以上的嘌【piào】呤或嘧啶核苷酸的【de】成串排列。

④避免引物内部出现二【èr】级结构，避【bì】免两【liǎng】条引物间互补，特别是3'端的【de】互补【bǔ】，否则会形成引物二聚【jù】体，产生非【fēi】特【tè】异【yì】的扩增条带【dài】。

⑤引物3'端的碱基【jī】，特别是末及倒数第二个碱基，应严格【gé】要求【qiú】配对【duì】，以【yǐ】避免因末端碱【jiǎn】基不配【pèi】对【duì】而导致PCR失败。

⑥引物中有【yǒu】或【huò】能加上合适的【de】酶切位点， 被扩增的靶【bǎ】序列*有适宜的【de】酶切位点【diǎn】， 这对【duì】酶切分析或分【fèn】子【zǐ】克隆很有好处。

⑦引物【wù】的特异【yì】性：引物应与【yǔ】核【hé】酸序列数据库【kù】的其它序列无明显同源性【xìng】。

引【yǐn】物量：每条引物的浓度0.1～1umol或【huò】10～100pmol，以*引物量【liàng】产生所需【xū】要的结果为好【hǎo】，引物浓度【dù】偏高会【huì】引起错配和【hé】非特异【yì】性扩增，且可增加【jiā】引物之【zhī】间形成二聚体的机会【huì】。