罗西奥病毒PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：罗西奥病毒PCR检测试剂盒

英文名称：Rocio VirusRTPCR

准备物品：

清【qīng】理液（A）                                   毫升

染色液【yè】（t B）                                 微升

稀【xī】释液（C）                                   毫升

溶解【jiě】液（tD）                                  毫升

产品说【shuō】明书【shū】                                     1份

注意事项：

1．基础程序。

2．扩增温度和延伸温度。

3．反应时间。

4．循环次数。

5．PCR 反应液的配制。

6．PCR技术的基本原理。

7．PCR的反应动力学。

8．PCR扩增产物。

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应的物【wù】质主【zhǔ】要【yào】有【yǒu】五种即引物、酶、dNTP、模板和【hé】Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，罗西奥病毒PCR检测试剂盒PCR 产物的【de】特异【yì】性取【qǔ】决于引物与模板DNA互补的程【chéng】度。理论上【shàng】，只要知【zhī】道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补【bǔ】的寡核【hé】苷酸链做引物，利用PCR就可【kě】将模【mó】板【bǎn】DNA在体【tǐ】外大【dà】量扩增【zēng】。设计引物应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩【kuò】增【zēng】跨度： 以200-500bp为宜【yí】，特定【dìng】条件下可扩【kuò】增长至10kb的片段。

③引物碱基：G+C含量以9-22%为宜，G+C太【tài】少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异【yì】条带。ATGC*随【suí】机分布，避免5个以上的【de】嘌【piào】呤或【huò】嘧啶核苷酸的成串排【pái】列【liè】。

④避免引物内部出现【xiàn】二级结构，避免两条引【yǐn】物间互补，特别是3'端的【de】互补，否则【zé】会形成【chéng】引物二【èr】聚体，产生非特异的扩增条带【dài】。

⑤引物3'端的碱基，特别【bié】是【shì】末及倒数第二个【gè】碱基，应严格要【yào】求【qiú】配对，以避【bì】免【miǎn】因末端【duān】碱【jiǎn】基不配对而导致PCR失败。

⑥引物【wù】中有或能【néng】加上合适的酶切位点， 被扩增的【de】靶【bǎ】序列*有适宜【yí】的酶切位点， 这【zhè】对酶切分析或分【fèn】子克【kè】隆很有好处。

⑦引物的【de】特异性：引物应与核酸序列【liè】数据库的其它序列无明显同源【yuán】性【xìng】。

引【yǐn】物量：每条【tiáo】引物的浓【nóng】度0.1～1umol或【huò】10～100pmol，以*引物量产生所需要的结【jié】果【guǒ】为好，引物浓度偏高会引起错配和【hé】非特【tè】异性扩增，且可增【zēng】加引【yǐn】物之间形成二【èr】聚体【tǐ】的机会。