吕氏泰勒虫PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：吕氏泰勒虫PCR检测试剂盒

英文名称：Theileria lowenshuniPCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫【háo】升

染色液（t B）                                 微升

稀释液【yè】（C）                                   毫升

溶解液（tD）                                  毫升

产【chǎn】品说明书                                    1份【fèn】

注意事项：

1．基础程序。

2．扩增温度和延伸温度。

3．反应时间。

4．循环次数。

5．PCR 反应液的配制。

6．PCR技术的基本原理。

7．PCR的反应动力学。

8．PCR扩增产物。

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加【jiā】PCR反【fǎn】应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板【bǎn】和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，吕氏泰勒虫PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性【xìng】取决于引【yǐn】物与模板DNA互补的程度。理论【lùn】上【shàng】，只【zhī】要知道【dào】任【rèn】何一段模板【bǎn】DNA序列， 就【jiù】能【néng】按其设计互补的寡核【hé】苷酸链做引【yǐn】物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量【liàng】扩增。设计引物【wù】应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引【yǐn】物【wù】扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片【piàn】段。

③引物碱基：G+C含量【liàng】以9-22%为【wéi】宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过【guò】多【duō】易出【chū】现【xiàn】非特异【yì】条带。ATGC*随机分布，避免5个【gè】以【yǐ】上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免【miǎn】引物【wù】内部出现二级结构，避免两条引物间互【hù】补【bǔ】，特别是3'端的互补，否则会形成引物【wù】二聚【jù】体，产生非特异的扩增【zēng】条带。

⑤引物【wù】3'端的碱基，特别是末【mò】及倒数第二个碱【jiǎn】基，应严格要求配对，以避免因末端碱【jiǎn】基【jī】不配对而【ér】导【dǎo】致PCR失败。

⑥引物中有或能加上【shàng】合适的酶【méi】切位【wèi】点【diǎn】， 被【bèi】扩【kuò】增的靶【bǎ】序列*有【yǒu】适宜的酶切位点， 这对酶切【qiē】分【fèn】析或分子克隆很有好处。

⑦引物的特异【yì】性：引物【wù】应【yīng】与核酸序列【liè】数据库的其它序列无明【míng】显同【tóng】源性。

引物量：每条引【yǐn】物的浓度【dù】0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生【shēng】所【suǒ】需【xū】要【yào】的结果为好【hǎo】，引物浓度偏【piān】高会引起错配和非特异性【xìng】扩增，且可增加引物【wù】之间形成二聚体【tǐ】的机会。