轻型链球菌PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：轻型链球菌PCR检测试剂盒

英文名称：Streptococcus mitisPCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫升

染色【sè】液（t B）                                 微【wēi】升

稀释液（C）                                   毫升【shēng】

溶解液（tD）                                  毫【háo】升

产【chǎn】品说明书【shū】                                     1份

注意事项：

1．基础程序。

2．扩增温度和延伸温度。

3．反应时间。

4．循环次数。

5．PCR 反应液的配制。

6．PCR技术的基本原理。

7．PCR的反应动力学。

8．PCR扩增产物。

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参【cān】加PCR反【fǎn】应的物质主【zhǔ】要有五种即引物、酶、dNTP、模【mó】板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，轻型链球菌PCR检测试剂盒PCR 产物【wù】的特异性取【qǔ】决于引物与模板DNA互【hù】补的程度。理论上，只要知道任何一段模板【bǎn】DNA序列【liè】， 就能按其设计互【hù】补的寡核苷酸【suān】链做引物，利用【yòng】PCR就可将模板DNA在体外【wài】大量【liàng】扩增【zēng】。设【shè】计引物应遵【zūn】循【xún】以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增【zēng】跨度【dù】： 以200-500bp为宜，特【tè】定条件下可【kě】扩增【zēng】长至10kb的片段。

③引【yǐn】物碱基：G+C含量以9-22%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多【duō】易出现非特异条带。ATGC*随【suí】机【jī】分布，避免5个以上【shàng】的【de】嘌【piào】呤或嘧啶核【hé】苷酸的成串排列。

④避免引物【wù】内部出【chū】现二【èr】级结构，避免两【liǎng】条引物间互补，特别是3'端的互补，否【fǒu】则会形成【chéng】引物二聚体，产生非特异【yì】的扩增【zēng】条带【dài】。

⑤引【yǐn】物3'端的碱基，特别【bié】是末【mò】及倒数第二个【gè】碱【jiǎn】基，应严格要求配对，以避免【miǎn】因末端【duān】碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引【yǐn】物中有【yǒu】或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有【yǒu】适宜的【de】酶切位【wèi】点【diǎn】， 这对【duì】酶切分析或分【fèn】子克隆很有好处。

⑦引物的【de】特【tè】异性：引物应与核酸序列【liè】数据库的【de】其它序【xù】列无明显同源【yuán】性。

引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以【yǐ】*引物量产生所需【xū】要的结果为好，引物浓度【dù】偏高【gāo】会引起【qǐ】错配和非特异性扩增，且可增【zēng】加【jiā】引物之间形成二聚【jù】体的机会。