禽沙门氏菌PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：禽沙门氏菌PCR检测试剂盒

英文名称：Salmonella gullinarumPCR

准备物品：

清理【lǐ】液（A）                                   毫升

染色液（t B）                                 微升【shēng】

稀释液【yè】（C）                                   毫升

溶【róng】解液（tD）                                  毫升

产品说【shuō】明书                                     1份【fèn】

注意事项：

1．基础程序。

2．扩增温度和延伸温度。

3．反应时间。

4．循环次数。

5．PCR 反应液的配制。

6．PCR技术的基本原理。

7．PCR的反应动力学。

8．PCR扩增产物。

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应的物【wù】质主要有五种【zhǒng】即引【yǐn】物、酶【méi】、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，禽沙门氏菌PCR检测试剂盒PCR 产【chǎn】物【wù】的特【tè】异性取决于引物与模板DNA互补的【de】程度。理论上【shàng】，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设【shè】计【jì】互补【bǔ】的寡核苷酸链做引物，利用【yòng】PCR就可【kě】将模板DNA在体外大量扩增【zēng】。设计引【yǐn】物【wù】应遵循以下【xià】原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增【zēng】跨度： 以【yǐ】200-500bp为宜，特定【dìng】条【tiáo】件下可扩增长【zhǎng】至10kb的片段。

③引物碱基：G+C含量以9-22%为宜，G+C太少扩增效果【guǒ】不佳，G+C过【guò】多易出【chū】现【xiàn】非特【tè】异【yì】条带。ATGC*随机分【fèn】布【bù】，避免5个以上的【de】嘌呤或嘧啶核苷酸的【de】成串排列。

④避免引物内部出现【xiàn】二级结构，避免【miǎn】两条【tiáo】引物间【jiān】互补，特别是3'端的互【hù】补，否则会形成引物二【èr】聚体，产生非特异【yì】的扩增【zēng】条带【dài】。

⑤引物3'端的【de】碱基，特别是【shì】末及倒数第二个【gè】碱基【jī】，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致【zhì】PCR失【shī】败。

⑥引物中有或能加上合适【shì】的【de】酶切【qiē】位点， 被【bèi】扩增的靶序列*有适宜的酶【méi】切【qiē】位点【diǎn】， 这对酶切分析或分【fèn】子克隆【lóng】很有好处【chù】。

⑦引物的特【tè】异性【xìng】：引物【wù】应与核酸序列数【shù】据库的其它【tā】序列无明显同源性。

引【yǐn】物量：每【měi】条引物的【de】浓【nóng】度0.1～1umol或10～100pmol，以【yǐ】*引【yǐn】物量产生所需【xū】要的结【jié】果为好，引物浓度偏高会引【yǐn】起错【cuò】配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。