羌虫病立克次氏体PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：羌虫病立克次氏体PCR检测试剂盒

英【yīng】文名称：Rickettsia tsutsugamushiPCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫升【shēng】

染色液（t B）                                 微升【shēng】

稀【xī】释液（C）                                   毫升

溶解【jiě】液（tD）                                  毫升

产品说明【míng】书【shū】                                     1份

注意事项：

1．基础程序。

2．扩增温度和延伸温度。

3．反应时间。

4．循环次数。

5．PCR 反应液的配制。

6．PCR技术的基本原理。

7．PCR的反应动力学。

8．PCR扩增产物。

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参【cān】加PCR反应的物质主要【yào】有【yǒu】五种【zhǒng】即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，羌虫病立克次氏体PCR检测试剂盒PCR 产【chǎn】物的特【tè】异性【xìng】取决【jué】于引物与【yǔ】模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任【rèn】何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核【hé】苷酸链【liàn】做引【yǐn】物【wù】，利用PCR就可将模板DNA在【zài】体外大量扩增。设计引物【wù】应【yīng】遵循以下原【yuán】则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以【yǐ】200-500bp为宜，特定条件下【xià】可【kě】扩增长【zhǎng】至10kb的片段。

③引【yǐn】物碱基：G+C含【hán】量【liàng】以9-22%为宜，G+C太少扩增效果【guǒ】不佳【jiā】，G+C过多易出【chū】现非特【tè】异条【tiáo】带。ATGC*随【suí】机【jī】分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷【gān】酸的成串排列。

④避免引物内部【bù】出现二【èr】级结构，避免【miǎn】两【liǎng】条【tiáo】引物间【jiān】互补，特【tè】别是3'端的互【hù】补【bǔ】，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。

⑤引物【wù】3'端的碱基，特【tè】别是末及倒数第二个【gè】碱基，应严格要求【qiú】配对，以避免因【yīn】末端【duān】碱基不配对【duì】而导致PCR失败【bài】。

⑥引物中有【yǒu】或能【néng】加上合适的酶【méi】切位点， 被扩增的【de】靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析【xī】或分【fèn】子【zǐ】克隆很有【yǒu】好处【chù】。

⑦引【yǐn】物的特异性：引物应与【yǔ】核酸序列数据库的其它序列无明显同源【yuán】性【xìng】。

引物量：每条引物的浓度【dù】0.1～1umol或10～100pmol，以【yǐ】*引物量【liàng】产生【shēng】所需要的结果【guǒ】为好，引物【wù】浓度【dù】偏高会引【yǐn】起错配【pèi】和非特【tè】异性扩增，且可增【zēng】加引物之【zhī】间形成【chéng】二聚体的机会。