神经外胚层肿瘤细胞（TC-71）

神经外胚层肿瘤细胞(TC-71)
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基(RPMI-1640:GIBCO)，90%;胎【tāi】牛【niú】血清，10%。
2.培【péi】养条件：气相：空气，95%;二氧化【huà】碳【tàn】，5%。温【wēn】度：37°C，培【péi】养箱湿度【dù】为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含【hán】有lmL细胞悬液的冻【dòng】存【cún】管迅速放入37°C水【shuǐ】浴【yù】中【zhōng】（水面要【yào】低【dī】于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含【hán】有4mL培养基【jī】的15ml离【lí】心管中混【hún】合均匀。在1000RPM条【tiáo】件下离心4分【fèn】钟，弃去上清液，加入lmL培养基后吹【chuī】匀。然【rán】后将所有细胞悬液移入【rù】含有5ml培【péi】养基【jī】的培【péi】养瓶【píng】中培养过夜。第二天换液并【bìng】检【jiǎn】查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
神经外胚层肿瘤细胞(TC-71)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养【yǎng】上【shàng】清【qīng】，用不【bú】含钙、镁离子的【de】PBS润洗细胞9-21次。力口【kǒu】2m丨消化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中【zhōng】，置【zhì】于37°C培【péi】养箱中消化9-21分钟，然后在显微【wēi】镜下观察细胞消化情况，若细胞【bāo】大部分变圆并脱落，迅速拿回操【cāo】作【zuò】台，轻敲几【jǐ】下培养【yǎng】瓶【píng】后加入3ml此【cǐ】细【xì】胞的 培【péi】养基终止消化。轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离心4分【fèn】钟，弃去上【shàng】清液，加【jiā】入lmL培养液后吹匀【yún】。移【yí】入到事先准备好的【de】含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有【yǒu】14ml培养基的【de】T-75培养瓶【píng】中培养【yǎng】。
 
细胞【bāo】冻存：待细【xì】胞生【shēng】长状【zhuàng】态良好时【shí】，可进【jìn】行细胞冻存【cún】。贴壁细【xì】胞冻存时，先【xiān】要消化处理【lǐ】并进行【háng】细胞计数【shù】。消化方【fāng】法按照细胞【bāo】传代方法的9-21步【bù】骤进行，后的重悬【xuán】液使【shǐ】用血清【qīng】。悬浮细胞直【zhí】接计数后离【lí】心【xīn】，用血清重悬浮，加DMSO至终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每【měi】lml的数量分配到冻存管中。本公司【sī】按每个冻存管细胞【bāo】数【shù】目大于1X106个细胞冻存。
 
注意事项：
收到细【xì】胞后，若发现【xiàn】干冰【bīng】己挥发干【gàn】净、冻存【cún】管【guǎn】瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请【qǐng】立即与【yǔ】我们电联。
所有动物细【xì】胞均视为有潜在的生物危害【hài】性【xìng】，必【bì】须在二级生物安全【quán】台内操作【zuò】，并请注意防护，所【suǒ】有废液【yè】及接触过此细胞【bāo】的【de】器【qì】皿需要灭菌【jun1】后方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：神经外胚层
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
神经外胚层肿瘤细胞(TC-71)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显微镜下确认细胞生长【zhǎng】状态【tài】，去掉封口膜并【bìng】将T25瓶【píng】置于【yú】37°C培养【yǎng】约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果【guǒ】细胞长满【mǎn】（90%以上）请【qǐng】及时进行细胞传【chuán】代，传代培养用6ml本【běn】公【gōng】司附带的*培养基。
5.接【jiē】到细胞【bāo】次日，请检查【chá】细胞【bāo】是否污【wū】染，若发【fā】现污染或疑似污【wū】染，请及时与我们取得电联。
细胞用途：仅供使用。