人前列腺癌细胞 （VCaP）

人前列腺癌细胞 (VCaP)
细胞介绍：
1997从【cóng】一位不【bú】受【shòu】激【jī】素影响的前列腺癌患者脊椎转移灶中建【jiàn】立了这株细胞。先在小【xiǎo】鼠中进行异种移【yí】植传代，随后进行体外培养【yǎng】。体内【nèi】及体外都对雄性激【jī】素【sù】敏【mǐn】感。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】 DMEM-H 培养【yǎng】基(DMEM-H，GIBCO，添【tiān】加 NaHC031.5g/L)，90%;胎牛血清【qīng】，10%。（DMEM 液体培养基：GIBCO，11995-065)。
2.培养条件：气相：空【kōng】气【qì】，95%;二氧化碳，5%。温【wēn】度：37摄氏度，培养箱湿度【dù】为70%-80%。
3.冻存液：90%*培【péi】养【yǎng】基，10%DMSO,现用现配。液氮【dàn】储存【cún】。
 
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将含有【yǒu】lmL细胞悬液【yè】的冻存管在37°C水浴中迅【xùn】速摇晃解【jiě】冻【dòng】，加入4mL培养基混合均匀【yún】。在1000RPM条件下离【lí】心4分钟【zhōng】，弃去上清液，补【bǔ】加l-2mL培养基后吹【chuī】匀【yún】。然后将【jiāng】所有细胞悬液加入培【péi】养瓶中【zhōng】培养过夜（或将细胞悬液加入【rù】l〇cm皿中【zhōng】，加入约8ml培【péi】养基，培养过【guò】夜）。第二【èr】天换【huàn】液并【bìng】检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人前列腺癌细胞 (VCaP)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清【qīng】，用不【bú】含钙、镁离子的【de】PBS润洗细胞9-21次【cì】。力口2m丨【shù】消【xiāo】化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养瓶【píng】中【zhōng】，置于37°C培养箱【xiāng】中消化【huà】9-21分【fèn】钟，然后在显微镜下【xià】观察细胞消化情【qíng】况【kuàng】，若细胞大部分变圆【yuán】并脱落，迅速【sù】拿【ná】回操作台，轻敲几【jǐ】下【xià】培【péi】养瓶后加少量培【péi】养基终止消化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后【hòu】吸出，在1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去【qù】上清液，补加l-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1: 2到【dào】1: 5的比【bǐ】例分到新【xīn】的含8ml培养基的新皿中或者瓶【píng】中。
 
细胞冻存：待细胞生长状【zhuàng】态良【liáng】好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞【bāo】冻【dòng】存时，弃去【qù】培养基后加【jiā】入少量胰酶，细胞变【biàn】圆脱落后，加【jiā】入【rù】约lml含【hán】血清【qīng】的【de】培养基后 加入冻【dòng】存管【guǎn】中【zhōng】，再添加1〇%DMSO后进行冻存。

注意事项：
收到细胞【bāo】后，若【ruò】发现干冰己【jǐ】挥发干净、冻存【cún】管瓶盖【gài】脱落【luò】、破损及细胞【bāo】有污染，请立即与我们电联。
所有动物细【xì】胞均视为【wéi】有【yǒu】潜在的生物危害性【xìng】，必须在二级【jí】生物安全台内操作，并【bìng】请注意防护，所有废液【yè】及【jí】接触过此细胞的器【qì】皿需要灭【miè】菌后方【fāng】能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：前列腺癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人前列腺癌细胞 (VCaP)运【yùn】输和保存：使用含有胎牛血【xuè】清【qīng】的2ml冻存管发送存【cún】活【huó】细胞【bāo】。收到细【xì】胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃【qì】去上【shàng】清，加入【rù】推【tuī】荐使用的培养基后转移至l〇cm培养【yǎng】皿或者T75培养瓶中培养，传代达【dá】到细胞生长【zhǎng】状【zhuàng】态【tài】良好时【shí】，再【zài】进【jìn】行冻存【cún】。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。