人膀胱移行细胞癌细（UM-UC-3）

人膀胱移行细胞癌细(UM-UC-3)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备DMEM培养基(GIBCO)，90%;胎牛血清【qīng】，10%。
2.培养条【tiáo】件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度【dù】：37摄氏度【dù】，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻【dòng】存液【yè】：90%*培养基，10%DMSO,现用现【xiàn】配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将含有lmL细胞悬液【yè】的冻【dòng】存管在37°C水浴中迅速摇【yáo】晃解【jiě】冻，加入【rù】4mL培养基混【hún】合均【jun1】匀。在1000RPM条件下离【lí】心4分钟，弃去上清液【yè】，补加l-2mL培养基后吹匀。然后【hòu】将所有细胞悬液【yè】加入培养瓶中培养过夜（或将【jiāng】细【xì】胞悬液加入l〇cm皿中【zhōng】，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并【bìng】检【jiǎn】查细胞【bāo】密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人膀胱移行细胞癌细(UM-UC-3)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃【qì】去培养上【shàng】清，用不含【hán】钙、镁【měi】离【lí】子的PBS润【rùn】洗细胞9-21次。力口2m丨【shù】消【xiāo】化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中【zhōng】，置于37°C培养箱中消化9-21分钟【zhōng】，然后【hòu】在显微镜【jìng】下观【guān】察细胞消化情况，若细胞大【dà】部分变圆【yuán】并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培【péi】养瓶后加少量培养基终止消化。按【àn】6-8ml/瓶补加培养基【jī】，轻【qīng】轻打匀后吸【xī】出，在【zài】1000RPM条件下【xià】离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培【péi】养液后吹匀。将细【xì】胞悬液【yè】按【àn】1: 2到【dào】1: 5的比例分到【dào】新的含【hán】8ml培养基的新皿中或者瓶中。
 
3)细胞冻存：待细胞生长状态良好【hǎo】时【shí】，可进行细胞冻【dòng】存。贴壁细胞冻存时，弃【qì】去【qù】培养基后加【jiā】入少量胰酶，细胞变圆【yuán】脱落后，加入约lml含【hán】血清的培【péi】养基后加【jiā】入冻存管中，再添【tiān】加1〇%DMSO后进行冻【dòng】存【cún】。
 
注意事项：
收到细胞后，若发现干冰【bīng】己挥发干净、冻存【cún】管瓶盖脱落、破【pò】损及细胞有污染，请立【lì】即与我【wǒ】们【men】电联。
所【suǒ】有【yǒu】动【dòng】物细胞均视为有潜【qián】在的生物危害性【xìng】，必须【xū】在二级生物【wù】安全台内操作，并请注意防护，所有废【fèi】液及接触过【guò】此细胞的器皿【mǐn】需要灭菌后方能丢【diū】弃。
 
细胞特性：
1)来源：膀胱
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人膀胱移行细胞癌细(UM-UC-3)运输和保存：使【shǐ】用含有胎牛血清的2ml冻存管发【fā】送存活细胞。收【shōu】到【dào】细胞后，可【kě】在1000RPM，常温条件下，离心【xīn】5min后，于洁净操作台弃去上清【qīng】，加入推荐使用的【de】培【péi】养基后【hòu】转【zhuǎn】移至【zhì】l〇cm培【péi】养皿【mǐn】或者T25培养瓶中培养，传代达到细【xì】胞生【shēng】长状态良好时，再进行冻存。具体操作【zuò】见细【xì】胞培养【yǎng】步骤。
细胞用途：仅供使用。