人胚肺细胞 （WI-38）

人胚肺细胞 (WI-38)
细胞介绍：
WI-38人二倍体【tǐ】细胞系来自3个【gè】月的正常胚胎肺组织【zhī】。该细胞系是【shì】首株用于人【rén】类疫苗制备【bèi】的人二【èr】倍【bèi】体细胞系。培养液【yè】中添加TNFalpha可以促进细胞生长【zhǎng】。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 MEM 培养基(MEM:GIBCO);北美【měi】胎牛【niú】血清(United States， GIBCO )，10%; PS 1%。

2.培【péi】养条件：气相【xiàng】：空【kōng】气，95%;二氧化碳，5%。温【wēn】度：37摄氏度，培养箱湿度为【wéi】70%-80%。
3.冻【dòng】存液【yè】：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮【dàn】储存。z〇cm皿中，加入约8ml培养基【jī】，培养过夜）。第【dì】二天换液并检查细胞密度。
2.细【xì】胞【bāo】传代：如果【guǒ】细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养【yǎng】。
 
人胚肺细胞 (WI-38)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上【shàng】清，用不含【hán】钙、镁离子【zǐ】的PBS润洗【xǐ】细胞9-21次。力口【kǒu】2m丨消【xiāo】化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培【péi】养箱中消化9-21分钟，然后在显微镜下观察细【xì】胞消化情况【kuàng】，若细胞大部分变圆【yuán】并脱落，迅速【sù】拿回操作台，轻敲【qiāo】几下培【péi】养瓶后加2ml*培养【yǎng】基 终止消【xiāo】化【huà】。按6-8ml/瓶补加培【péi】养【yǎng】基，轻轻打【dǎ】匀【yún】后【hòu】吸出，在1000RPM条件【jiàn】下离【lí】心【xīn】4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基后吹匀。将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新【xīn】的【de】含8ml培养基的新皿中或【huò】者瓶中。
3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细胞冻存时，弃【qì】去培养基后，PBS清洗瓶【píng】底9-21次后【hòu】加入lml胰酶，细胞变圆脱落后【hòu】，加【jiā】入2ml*培养基终【zhōng】止【zhǐ】消化，可【kě】使用血【xuè】球【qiú】计【jì】数【shù】板计数。1000RPM离【lí】心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加【jiā】DMSO至终浓度为10%。加入【rù】DMSO后迅速【sù】混匀，按每lml的数量分配到【dào】冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细【xì】胞数目大于【yú】1X106个【gè】细胞冻【dòng】存。将冻存管置于【yú】程序降温【wēn】盒【hé】中【zhōng】，放入【rù】-80度冰【bīng】箱【xiāng】，至少2个小【xiǎo】时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
 
注意事项：
收【shōu】到细胞后，若发现干冰己挥发【fā】干净、冻【dòng】存管【guǎn】瓶盖脱落【luò】、破损【sǔn】及细【xì】胞有污染，请立即与我们电联。
所【suǒ】有动物细胞均视为有潜在【zài】的生物危害性【xìng】，必【bì】须在二【èr】级【jí】生【shēng】物安【ān】全台内操作，并请注意防护，所有废液【yè】及接触过此细胞的器【qì】皿需要灭菌后方【fāng】能【néng】丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：正常肺
2)形态：成纤维细胞
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人胚肺细胞 (WI-38)运输和保存：使用含有胎牛血清的2ml冻【dòng】存管发送【sòng】存活细胞。收到细胞后【hòu】，可【kě】在1000RPM，常温【wēn】条件【jiàn】下【xià】，离心5min后，于洁净操【cāo】作【zuò】台弃去上清，加入推【tuī】荐【jiàn】使用的培养基【jī】后转移至l〇cm培养皿或者【zhě】T25培养瓶中培养【yǎng】，传代达到细胞生【shēng】长【zhǎng】状态良好时，再【zài】进行冻存。具体【tǐ】操作见细【xì】胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。