人头颈鱗癌细胞 （Tu212）

人头颈鱗癌细胞 (Tu212)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】 DMEM/F12 培养【yǎng】基(DMEM/F12:GIBCO)，90%;胎牛【niú】血清，10%。
2.培养【yǎng】条件：气相：空【kōng】气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度【dù】，培【péi】养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养【yǎng】基，10%DMSO,现用现【xiàn】配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细【xì】胞：将含有lmL细【xì】胞悬液的冻存管在【zài】37°C水浴中迅【xùn】速摇晃解冻，加入4mL培【péi】养基混合均匀【yún】。在【zài】1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟【zhōng】，弃去上清【qīng】液，补加l-2mL培养基后吹匀。然【rán】后将【jiāng】所有细胞【bāo】悬【xuán】液加入培【péi】养瓶中培养【yǎng】过夜（或将细胞悬液【yè】加入l〇cm皿中，加入约8ml培【péi】养【yǎng】基，培养过夜）。第二天换液并【bìng】检查细胞【bāo】密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人头颈鱗癌细胞 (Tu212)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养【yǎng】上清，用不含钙、镁离【lí】子的PBS润洗【xǐ】细胞9-21次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中消化9-21分【fèn】钟，然【rán】后在【zài】显【xiǎn】微镜【jìng】下观察细【xì】胞消化情况，若细胞【bāo】大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几【jǐ】下培养【yǎng】瓶【píng】后【hòu】加少量【liàng】培养【yǎng】基终止消化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心【xīn】4分钟【zhōng】，弃去上清【qīng】液【yè】，补加【jiā】l-2mL培养液【yè】后吹【chuī】匀。将【jiāng】细【xì】胞悬液【yè】按【àn】1: 2到1: 5的比【bǐ】例分到【dào】新的含8ml培养【yǎng】基的新皿中或者瓶中。
 
细【xì】胞冻存：待细胞生长状态良好【hǎo】时，可进行细【xì】胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去【qù】培养基【jī】后加【jiā】入少【shǎo】量胰酶，细胞变圆【yuán】脱落后，加入【rù】约【yuē】lml含血【xuè】清的培养【yǎng】基后 加入冻存管中【zhōng】，再添加1〇%DMSO后进【jìn】行冻存【cún】。
 
注意事项：
收到细胞后，若发现干【gàn】冰己挥【huī】发干净、冻【dòng】存管【guǎn】瓶盖脱落、破【pò】损及细胞【bāo】有污染，请立即与我们【men】电联。
所有动物细【xì】胞均视为有潜在的生物危害性，必须【xū】在二级【jí】生【shēng】物安全台内操【cāo】作，并请【qǐng】注意防护，所有废液【yè】及【jí】接【jiē】触【chù】过此细胞的器皿需【xū】要灭菌后【hòu】方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：头颈鳞癌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人头颈鱗癌细胞 (Tu212)运输和保存：使用含【hán】有胎牛血【xuè】清的2ml冻存管【guǎn】发【fā】送存活细胞。收到细胞【bāo】后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后【hòu】，于洁【jié】净操作台弃去【qù】上清，加入【rù】推荐【jiàn】使用的【de】培养基后转【zhuǎn】移至【zhì】l〇cm培养皿或者T75培养瓶中培养，传【chuán】代【dài】达到细胞生长状态【tài】良好【hǎo】时，再进行【háng】冻存。具体操作见细胞培养步【bù】骤。
细胞用途：仅供使用。