人食管癌细胞（TE-5）

人食管癌细胞(TE-5)
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备 RPIVM-1640 培【péi】养基(RPMI-1640:GIBCO)，90%;胎牛【niú】血清，10%。
2.培【péi】养【yǎng】条件：气相：空气【qì】，95%;二氧化碳，5%。温度：37°C，培养箱【xiāng】湿度为【wéi】70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将【jiāng】含有【yǒu】lmL细胞悬液的冻存管【guǎn】迅【xùn】速放入37°C水浴中（水面要低于冻存【cún】管【guǎn】盖部【bù】）摇晃解冻【dòng】，移入事先准备【bèi】好【hǎo】的含【hán】有4mL培养【yǎng】基的【de】15ml离心【xīn】管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去【qù】上【shàng】清液，加入lmL培养基后【hòu】吹匀。然后将所有细胞悬液移【yí】入含有5ml培【péi】养基【jī】的【de】培养瓶中培养【yǎng】过夜。第二天换液并检【jiǎn】查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人食管癌细胞(TE-5)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含【hán】钙、镁离子的PBS润洗【xǐ】细【xì】胞9-21次。力口【kǒu】2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中【zhōng】，置于37°C培【péi】养箱中消化9-21分钟，然后在显微镜下观察细胞消化【huà】情【qíng】况，若细胞大部分变【biàn】圆并脱落，迅速拿【ná】回操作台，轻【qīng】敲【qiāo】几【jǐ】下培养【yǎng】瓶后【hòu】加入3ml此细【xì】胞的【de】培养基终【zhōng】止消【xiāo】化。轻轻吹打后【hòu】吸出【chū】，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离心4分钟，弃【qì】去上【shàng】清液，加入lmL培养液【yè】后吹【chuī】匀。移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培【péi】养瓶中或【huò】含【hán】有14ml培养【yǎng】基【jī】的T-75培【péi】养【yǎng】瓶中培养。
 
细胞【bāo】冻【dòng】存：待细胞生长状态良好时，可【kě】进行细胞冻存。贴壁细胞冻存【cún】时，先要【yào】消化处理并进行细【xì】胞计数。消化方法按照细胞传代方法的9-21步骤进行，后【hòu】的重悬液使用血清。悬浮细【xì】胞直【zhí】接【jiē】计数后离心，用血【xuè】清重【chóng】悬浮，加DMSO至终浓度【dù】为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每lml的【de】数量分配【pèi】到冻【dòng】存【cún】管【guǎn】中。本公司按每【měi】个冻存【cún】管细【xì】胞数【shù】目大于1X106个细胞冻存。
 
注意事项：
收到细胞后，若【ruò】发现干【gàn】冰己挥发干【gàn】净、冻存管瓶盖脱落、破损【sǔn】及细【xì】胞有污染【rǎn】，请立即与我们电联。
所有【yǒu】动物细胞【bāo】均【jun1】视为有潜在的生物危害性，必须在【zài】二级【jí】生物【wù】安【ān】全台内【nèi】操作，并【bìng】请注意防【fáng】护，所有废液及接触【chù】过此细胞【bāo】的器皿需要灭菌后方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：食管癌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人食管癌细胞(TE-5)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显【xiǎn】微镜下【xià】确【què】认【rèn】细胞【bāo】生长状态，去掉封口【kǒu】膜并【bìng】将T25瓶置于37°C培养约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如【rú】果细【xì】胞长满（90%以上【shàng】）请及【jí】时进【jìn】行细胞【bāo】传代【dài】，传代培养用6ml本公司附带的*培养基。
5.接【jiē】到细胞次日，请检查细胞是【shì】否污染，若发现污染或疑似污染【rǎn】，请及时与【yǔ】我【wǒ】们取得【dé】电联【lián】。
细胞用途：仅供使用。