人正常前列腺基质永生化细胞 （WPMY-1）

人正常前列腺基质永生化细胞 (WPMY-1)
细胞介绍：
通过【guò】一【yī】个pRSTV质料结构，用SV40大T抗原对【duì】基质【zhì】细胞【bāo】进行【háng】永生化。肌【jī】成纤维基质【zhì】细胞株【zhū】，WPMY-1与RWPE-1细【xì】胞【bāo】一样，来源于同一张【zhāng】成人前列腺组织切片的周围【wéi】区域的基质细胞。
 
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1.培养基及培养冻存条件准备：
1.准备DMEM培养基【jī】(DMEM，GIBCO)，95%;胎牛【niú】血清，5%。
2.培养条件【jiàn】：气相：空气，95%;二氧【yǎng】化碳【tàn】，5%。温度：37°C，培养箱湿【shī】度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2.细胞处理：
1)复苏细胞：将含有lmL细胞悬液【yè】的冻存管迅【xùn】速放入37°C水浴中（水【shuǐ】面要低于冻存管【guǎn】盖部）摇晃解冻，移入【rù】事先准备好的【de】含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在【zài】1000RPM条件下离【lí】心4分钟【zhōng】，弃去上清液，加【jiā】入lmL培 养基后吹【chuī】匀。然【rán】后将【jiāng】所有【yǒu】细【xì】胞悬液【yè】移入【rù】含有5ml培【péi】养基的培养瓶中培【péi】养【yǎng】过夜。第二【èr】天换液并检查细胞密度【dù】。
2)细胞传代【dài】：如果细【xì】胞密度达【dá】80%-90%，即【jí】可进【jìn】行传代培养。
 
人正常前列腺基质永生化细胞 (WPMY-1)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去【qù】培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润【rùn】洗细胞9-21次。力【lì】口2m丨【shù】消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶中【zhōng】，置【zhì】于37°C培养箱中消【xiāo】化9-21分钟，然后在显微镜下观察细胞消【xiāo】化情况，若细【xì】胞大【dà】部【bù】分变圆并脱落，迅【xùn】速拿回操作台，轻敲几下培【péi】养瓶后加【jiā】入【rù】3ml此细胞的 培【péi】养【yǎng】基终止消化。轻轻吹打后吸出【chū】，移入【rù】15ml离心管中，在1000RPM条件下【xià】离心4分钟，弃去上清【qīng】液，加入lmL培养液后吹匀。移入到【dào】事先准【zhǔn】备好的【de】含有5ml培养【yǎng】基【jī】的T-25培养瓶中【zhōng】或含有14ml培养 基的T-75培【péi】养瓶中培养。
 
细【xì】胞【bāo】冻存：待细胞【bāo】生长状态良【liáng】好时【shí】，可进【jìn】行细胞【bāo】冻存。贴壁细胞冻存时，先要【yào】消化处理并进行细胞计数。消化方【fāng】法按照细胞【bāo】传代【dài】方法的9-21步骤进行，后的重悬液使用血清。悬浮细胞直接计数后【hòu】离心，用血【xuè】清重悬【xuán】浮，加DMSO至【zhì】终【zhōng】浓度为【wéi】10%。加【jiā】入【rù】DMSO后迅速混【hún】匀，按【àn】每lml的数量分配到冻存管中。本公司按每个【gè】冻存管细胞数目【mù】大于1X106个【gè】细胞冻存【cún】。
 
注意事项：
收到细胞后【hòu】，若发现干冰己【jǐ】挥【huī】发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细【xì】胞有污染，请立即【jí】与我们电联【lián】。
所有动物【wù】细【xì】胞【bāo】均视为有潜在【zài】的【de】生物危害性，必【bì】须在二级生物安全台内操作，并请注意【yì】防护，所有【yǒu】废液及【jí】接触过此细胞的器皿需【xū】要灭菌后【hòu】方能【néng】丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：前列腺
2)形态：成肌细胞，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人正常前列腺基质永生化细胞 (WPMY-1)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显【xiǎn】微镜下确认细胞生长状态，去掉封【fēng】口【kǒu】膜【mó】并将T25瓶置于【yú】37°C培养约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细【xì】胞长【zhǎng】满【mǎn】（90%以上【shàng】）请及时【shí】进行细胞传代，传代培养用6ml本公【gōng】司附 带的【de】*培养基。
5.接到细胞次日，请检查细【xì】胞是【shì】否污【wū】染，若发现污染【rǎn】或【huò】疑似污染【rǎn】，请及时与我 们取得电联【lián】。
细胞用途：仅供使用。