人喉癌细胞 （TU 686）

人喉癌细胞 (TU 686)
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备【bèi】 RPIVM-1640 培养基(RPMI-1640:GIBCO)，90%;胎牛血清，10%。
2.培【péi】养条件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温【wēn】度【dù】：37°C，培【péi】养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将【jiāng】含【hán】有lmL细胞悬液【yè】的冻存管迅速【sù】放【fàng】入37°C水浴中（水面要低于冻存管盖部【bù】）摇晃解冻，移入事先准【zhǔn】备好【hǎo】的含有4mL培养基的【de】15ml离心管【guǎn】中混【hún】合均【jun1】匀。在1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟【zhōng】，弃去上清液，加入lmL培 养基后吹匀【yún】。然后将【jiāng】所有细胞悬液移入含【hán】有【yǒu】5ml培【péi】养基【jī】的【de】培养瓶中【zhōng】培养过夜。 第二天换液并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人喉癌细胞 (TU 686)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养【yǎng】上清，用不含钙【gài】、镁离【lí】子的PBS润洗细胞【bāo】9-21次。力口【kǒu】2m丨【shù】消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培【péi】养瓶中，置于37°C培养箱中消化9-21分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细【xì】胞大部【bù】分变圆并脱【tuō】落【luò】，迅【xùn】速【sù】拿【ná】回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化【huà】。轻【qīng】轻吹打后吸出【chū】，移入15ml离心管中【zhōng】，在【zài】1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】， 弃【qì】去上清液，加入lmL培养液【yè】后【hòu】吹【chuī】匀【yún】。移入到事先【xiān】准备【bèi】好的含有5ml培养【yǎng】基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的【de】T-75培养瓶中培养。
 
细【xì】胞冻存：待细【xì】胞生长【zhǎng】状【zhuàng】态良好时【shí】，可进行细【xì】胞冻存。贴【tiē】壁细胞冻存时，先要【yào】消化处【chù】理并进行细胞计数【shù】。消化方【fāng】法按【àn】照细胞传代方法的9-21步骤进行【háng】，后的重悬液使【shǐ】用血清。悬浮【fú】细胞直接计数【shù】后离心，用血清【qīng】重悬浮，加DMSO至终浓度为10%。加入DMSO后迅【xùn】速混匀，按每lml的数量分配到冻存管【guǎn】中。本【běn】公司按每个冻【dòng】存管细胞【bāo】数目大于【yú】1X106个细胞冻存【cún】。
 
注意事项：
收到【dào】细胞后，若发现干冰己挥【huī】发干净【jìng】、冻【dòng】存管【guǎn】瓶【píng】盖脱落、破损及【jí】细胞有污染，请立即【jí】与我们电联。
所有动物【wù】细胞均视为有潜在的【de】生物危害【hài】性，必须在二级生物安【ān】全台内操作，并请注意防护，所有废液【yè】及接触过此细胞的器【qì】皿需要灭菌后【hòu】方【fāng】能【néng】丢【diū】弃【qì】。
 
细胞特性：
1)来源：喉部
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人喉癌细胞 (TU 686)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显【xiǎn】微镜下确认细胞生【shēng】长【zhǎng】状态，去掉封【fēng】口膜并将T25瓶置于【yú】37°C培【péi】养约【yuē】 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细胞长满（90%以上）请及【jí】时【shí】进行细胞传代，传【chuán】代【dài】培养用6ml本【běn】公司附【fù】带的*培养基。
5.接【jiē】到【dào】细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污【wū】染【rǎn】或疑【yí】似【sì】污染，请及时与我们取【qǔ】得电联。
细胞用途：仅供使用。