人胚肾细胞（293T）

人胚肾细胞(293T)
细胞介绍
293细【xì】胞株插入SV40 T-抗原的温度敏感【gǎn】基因后产生的高转染效【xiào】率的衍生【shēng】株称【chēng】为293T。
 
细胞特性
1)来源：胚胎，肾脏
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
运【yùn】输和保存：使用【yòng】含有胎【tāi】牛血【xuè】清的2ml冻存管发送存活细胞。收到【dào】细胞后，可【kě】在1000RPM，常【cháng】温条件【jiàn】下，离心【xīn】5min后，于洁净操作台弃去上【shàng】清，加入推荐 使用的【de】培养基后【hòu】转移至l〇cm培养皿或者T25培【péi】养瓶中培养，传【chuán】代达到细【xì】胞【bāo】生长 状态【tài】良好时，再进行【háng】冻存。具体操作见【jiàn】细【xì】胞培养步骤。
 
人胚肾细胞(293T)细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备【bèi】DMEM培养基(DMEM，GIBCO,)，添加2mM L-谷氨酰胺; 北美胎牛血清(United States，GIBCO)，10%。也可根据卖骑 需要选择【zé】悬浮培养基，使293T细胞悬浮【fú】生长。
2. 培【péi】养【yǎng】条件：气相：空【kōng】气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏【shì】度，培养箱 湿度为70%-80%。
3.冻【dòng】存液【yè】：90%*培养基，10%DMSO,现用【yòng】现【xiàn】配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏细胞：将含【hán】有lmL细胞悬液的冻【dòng】存管在【zài】37°C水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟，弃【qì】去上【shàng】清液，补 加【jiā】l-2mL培养基【jī】后吹匀。然后将所有细胞【bāo】悬【xuán】液加入培养【yǎng】瓶中【zhōng】培养过【guò】夜（或将 细胞悬液加入【rù】l〇cm皿中，加入约8ml培【péi】养基，培养过夜）。第二【èr】天【tiān】换液并检 查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用【yòng】不含钙、镁离子【zǐ】的PBS润洗细胞9-21次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养【yǎng】箱中消化9-21分【fèn】钟，然后在显微【wēi】镜下观察细胞消化情况【kuàng】，若细胞大部【bù】 分变圆并脱【tuō】落，迅速【sù】拿回【huí】操作【zuò】台【tái】，轻敲几下【xià】培【péi】养瓶后加少量培【péi】养基终止消【xiāo】化。
按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后【hòu】吸出，在1000RPM条件【jiàn】下离心【xīn】4分 钟，弃【qì】去上清液，补加【jiā】l-2mL培养液后吹匀。将细【xì】胞悬【xuán】液按1: 2到1: 5的比【bǐ】例分【fèn】到新【xīn】的含8ml培养基【jī】的【de】新皿中或者
细胞【bāo】冻【dòng】存【cún】：待细胞生长状【zhuàng】态良好【hǎo】时，可【kě】进行细【xì】胞冻存。贴【tiē】壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少【shǎo】量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约lml含血清的培养【yǎng】基后加【jiā】入冻存管中【zhōng】，再添加1〇%DMSO后进行冻存【cún】。
 
人胚肾细胞(293T)注意事项：
收到细【xì】胞后【hòu】，若发【fā】现干【gàn】冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污【wū】染，请立即与我们【men】电联。
所有动物细胞均【jun1】视为有潜【qián】在的生【shēng】物危害性【xìng】，必【bì】须在二级生物安全台内操作，并请【qǐng】注意防护，所有废液及【jí】接触【chù】过此细【xì】胞的器皿需【xū】要灭菌后方能【néng】丢弃瓶中【zhōng】。