人肾透明细胞腺癌细胞 （786-0）

人肾透明细胞腺癌细胞 (786-0)
细胞介绍：
此细【xì】胞源自一个原发性透明细胞癌。此细【xì】胞有微绒毛【máo】和桥粒，能【néng】在软琼脂是生长。 此细胞的一个PTH样的多肽【tài】与乳癌【ái】和肺癌【ái】中的肽【tài】相似【sì】。这【zhè】个多【duō】肽的【de】N端与 PTH相似，活【huó】性与PTH相似，分子量为6000道尔顿【dùn】。
 
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培【péi】养基(RPMI-1640:GIBCO,北美胎【tāi】牛血清【qīng】 (United States, GIBCO)，10%;双抗 1%。
2. 培【péi】养【yǎng】条件：气相：空气，95%;二氧【yǎng】化【huà】碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理
1.复苏【sū】细胞【bāo】：将【jiāng】含有lmL细胞悬液的冻存管【guǎn】在37°C水浴中迅速摇【yáo】晃【huǎng】解冻，加 入【rù】4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心【xīn】4分钟，弃去【qù】上【shàng】清液，补加l-2mL培养基【jī】后【hòu】吹匀。然【rán】后将所【suǒ】有细胞悬液加入培养【yǎng】瓶中培养【yǎng】过【guò】夜（或将【jiāng】细胞悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换【huàn】液【yè】并检查细胞密度【dù】。
2.细胞传代【dài】：如果细胞密度【dù】达80%-90%，即【jí】可进行【háng】传代培【péi】养。
 
人肾透明细胞腺癌细胞 (786-0)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养【yǎng】上清，用不含钙、镁【měi】离子的PBS润洗细胞9-21次。力口2m丨消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置于37°C培养【yǎng】箱中消化9-21分【fèn】钟，然后【hòu】在显微【wēi】镜【jìng】下观【guān】察细胞消化情况，若细【xì】胞【bāo】大【dà】部分【fèn】变圆并脱落，迅【xùn】速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消【xiāo】化【huà】。按6-8ml/瓶补加培养基【jī】，轻轻打匀后【hòu】吸【xī】出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清【qīng】液，补加【jiā】l-2mL培养液后吹匀。将【jiāng】细胞【bāo】悬液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基的新【xīn】皿中或者瓶中。
3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底9-21次【cì】后加【jiā】入【rù】lml胰【yí】酶，细胞变圆脱落后，加入【rù】2ml*培养基终【zhōng】止消化，可使用血【xuè】球计数板计【jì】数。1000RPM离【lí】心5分钟去【qù】掉上清。用血清【qīng】重悬浮，加DMSO至终浓度为 10%。加入DMSO后迅速混【hún】匀，按【àn】每lml的数量【liàng】分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公【gōng】司【sī】按每个冻存管【guǎn】细胞数目大于1X106个细胞冻存。将冻存管【guǎn】置于程序降【jiàng】温盒中，放入-80度冰【bīng】箱【xiāng】，至【zhì】少2个小时以后【hòu】转入液【yè】氮灌储存。记录冻【dòng】存管位【wèi】置以便下【xià】次【cì】拿取。
 
注意事项：
收到细胞后，若【ruò】发现干冰【bīng】己挥发干【gàn】净、冻存管瓶盖脱【tuō】落、破损及细胞【bāo】有污染，请立【lì】即与我们电联【lián】。
所有动物【wù】细胞均视为有【yǒu】潜在的生【shēng】物危害性，必须在【zài】二级【jí】生物安全【quán】台内操作【zuò】，并请注意防护，所有废液及接【jiē】触【chù】过此细【xì】胞的器皿需要灭菌后【hòu】方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：肾；肾细胞腺癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人肾透明细胞腺癌细胞 (786-0)运输和保存：可选择【zé】干冰运输【shū】及发送复【fù】苏存活细胞【bāo】方式：（1)干冰运输【shū】，收到后立【lì】即转入液氮冻存或【huò】直接复苏；（2)存活【huó】细胞，收【shōu】到后应继续【xù】生长，传代达到细【xì】胞生长【zhǎng】状态良好时，再进【jìn】行【háng】冻【dòng】存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。