人T淋巴细胞白血病细胞（A3）

人T淋巴细胞白血病细胞(A3)
细胞介绍：
A3亚克【kè】隆来自jurkat细胞系【xì】。用Fas抗【kàng】体处理jurkat细胞，用【yòng】有【yǒu】限【xiàn】稀释法获得【dé】一个细胞系，此细胞系对Fas介导的凋亡产生自发抗性【xìng】的比例【lì】较【jiào】低。得到的【de】亚克隆【lóng】对Fas-介导的凋亡十分【fèn】敏感。挑【tiāo】选对新霉素具有抗【kàng】性的野【yě】生型【xíng】A3细胞，并三次 用移码突变诱变剂ICR-191进【jìn】行处理以分【fèn】离【lí】具有抗【kàng】Fas抗体【tǐ】杀伤的隐性突变体。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备 RPIVM-1640 培养基(RPMI-1640:GIBCO,，90%;胎牛血【xuè】清，10%。
2.培【péi】养条件：气相：空气【qì】，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培【péi】养【yǎng】箱湿度【dù】为【wéi】70%-80%。
3.冻存液【yè】：90%*培【péi】养基，10%DMSO,现用现配。液【yè】氮储存。

2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将含有lmL细【xì】胞【bāo】悬液的冻存管在37°C水浴【yù】中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基【jī】混合均【jun1】匀。在1000RPM条件下离心【xīn】4分【fèn】钟，弃【qì】去上清液，补加【jiā】l-2mL培养【yǎng】基【jī】后吹匀。然后将所【suǒ】有细【xì】胞悬液【yè】加入培养瓶中培养过夜【yè】（或将细【xì】胞悬液加入【rù】l〇cm皿【mǐn】中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并【bìng】检 查细胞密度【dù】。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

人T淋巴细胞白血病细胞(A3)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去【qù】培养上清，用不【bú】含钙【gài】、镁离子的PBS润洗细胞【bāo】9-21次。力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于【yú】37°C培养【yǎng】箱中消化9-21分钟，然后在显微镜下观【guān】察细【xì】胞消化情况【kuàng】，若细胞大部分变【biàn】圆并【bìng】脱落，迅速拿回操作台，轻【qīng】敲几【jǐ】下培养瓶【píng】后加少量培养基终【zhōng】止消化【huà】。按【àn】6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下【xià】离心4分【fèn】钟，弃【qì】去上清液，补【bǔ】加【jiā】l-2mL培【péi】养液后【hòu】吹【chuī】匀。将细【xì】胞悬液按【àn】1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或【huò】者【zhě】瓶中【zhōng】。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法【fǎ】一【yī】：收集细【xì】胞，1000RPM条件【jiàn】下【xià】离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL 培养液后吹匀，将细胞【bāo】悬【xuán】液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基的 新皿【mǐn】中【zhōng】或【huò】者【zhě】瓶中。
方法【fǎ】二：可【kě】选择半数【shù】换液方式，弃去半【bàn】数培养基后，将【jiāng】剩余细胞悬【xuán】起，将细胞悬液按1: 2到1: 3的比例【lì】分到新的含8ml培养【yǎng】基的新皿中或者瓶【píng】中。
细【xì】胞冻存：待【dài】细胞【bāo】生长状态良好时【shí】，可进行细胞冻【dòng】存。贴壁【bì】细胞冻存时，弃【qì】 去【qù】培【péi】养基后加【jiā】入少量胰【yí】酶，细胞变圆脱落后，加【jiā】入约lml含血清的培养基后加【jiā】入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻存。悬浮【fú】细胞冻存时【shí】，应【yīng】将细【xì】胞【bāo】收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量【liàng】保存上清液【yè】（防止细胞吸走)，加 入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中【zhōng】加入【rù】1〇%DMSO后进行冻 存【cún】。

注意事项：
收到细胞【bāo】后，若发现干冰己挥【huī】发干净、冻存【cún】管瓶盖脱落【luò】、破损及细【xì】胞有污染，请立即【jí】与我们【men】电联。
所有【yǒu】动物细胞均【jun1】视【shì】为有潜在的生【shēng】物危害性【xìng】，必须在二级生物安全台内操【cāo】作，并请注意防护，所有废【fèi】液及接【jiē】触过此细胞的【de】器皿【mǐn】需要灭菌后方【fāng】能【néng】丢弃。

细胞特性：
1)来源：T细胞白血病，T淋巴细胞
2)形态：淋巴母细胞
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装

人T淋巴细胞白血病细胞(A3)运输和【hé】保存：可选择干冰运输及【jí】发送复苏存活细【xì】胞【bāo】方式：（1)干冰运输，收到【dào】后立【lì】即转【zhuǎn】入液【yè】氮冻存或直接复【fù】苏【sū】；（2)存【cún】活【huó】细胞，收到后应继续【xù】生长，传代达到细 胞生长状【zhuàng】态良好时，再进行冻存。具体操作见细【xì】胞培养步【bù】骤。
细胞用途：仅供使用。