大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（未分化）PC-12M

大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（未分化）PC-12M
细胞介绍：
该细胞系来自能移植的雄【xióng】性大鼠【shǔ】肾上腺嗜【shì】铬细胞瘤【liú】。这些【xiē】细胞表【biǎo】达【dá】神经生长因【yīn】子(NGF)受体。NGF可诱导产【chǎn】生【shēng】神经表型。细胞不合成【chéng】肾上腺素。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1. 准备【bèi】 F12K 培【péi】养【yǎng】基(F12K: SIGMA，添【tiān】加 NaHC03 2.5g八)，80%;热灭活马血清，15%;胎牛【niú】血清，5%，添加1%PS。
2. 培【péi】养条件【jiàn】：气相：空气，95%;二氧化【huà】碳，5%。温度：37摄氏度。
3. 冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用【yòng】现配【pèi】。液氮储【chǔ】存。

2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将含有lmL细【xì】胞悬【xuán】液的冻存管在37°C水浴中迅速摇【yáo】晃解冻，加入4mL培养基混【hún】合均匀。在【zài】1000RPM条件【jiàn】下离心4分【fèn】钟，弃去上清液【yè】，加l-2mL培【péi】养基后吹匀。然【rán】后将【jiāng】所有细胞悬液加入【rù】培养瓶中培养过【guò】夜（或将细【xì】胞悬液【yè】加入【rù】l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养【yǎng】过夜）。第二天换液并检查细胞【bāo】密【mì】度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次。
力【lì】口 2m丨消【xiāo】化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培【péi】养箱【xiāng】中消化9-21分钟，然后在显微镜下观【guān】察【chá】细胞消化情况，若细胞大部分变圆【yuán】并【bìng】脱落【luò】，迅速拿【ná】回操作台，轻敲几下【xià】培【péi】养瓶后加少量培养基终止消【xiāo】化。
按6-8ml/瓶补【bǔ】加培养基，轻轻打匀后吸出【chū】，在1000RPM条【tiáo】件【jiàn】下离心【xīn】4分钟，弃去上【shàng】清液，补加l-2mL培养液后吹【chuī】匀。将细【xì】胞悬液按1: 2到【dào】1: 5的比例分到新的含8ml培养基的【de】新皿中或者瓶中。
细胞冻存【cún】：待细胞生【shēng】长状态良好时，可进行【háng】细【xì】胞冻【dòng】存。贴壁细胞冻存时，弃【qì】去【qù】培养基后加入少量胰酶，细胞【bāo】变圆脱落后，加【jiā】入约lml含血清的培【péi】养基后加入冻【dòng】存管中【zhōng】，再添加1〇%DMSO后进行冻存。
 
大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（未分化）PC-12M注意事项：
收到细【xì】胞后【hòu】，若发【fā】现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖【gài】脱落、破【pò】损及细胞有污染【rǎn】，请【qǐng】立【lì】即与我们电联。
所有动物细胞均视为有潜【qián】在的生物危害性【xìng】，必【bì】须在二级生物安全【quán】台内操作，并【bìng】请注意防护【hù】，所【suǒ】有废液及【jí】接触过此【cǐ】细胞的器皿需要灭菌【jun1】后方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤
2)形态：多角形
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（未分化）PC-12M运输和保存：使用含有【yǒu】胎【tāi】牛血清的【de】2ml冻存管【guǎn】发送存【cún】活细【xì】胞。收到【dào】细胞【bāo】后，可在【zài】1000RPM，常温条件下【xià】，离心5min后，于洁净操作台弃去上【shàng】清【qīng】，加入推【tuī】荐使用的培养基后转移至l〇cm培养皿或者T25培养【yǎng】瓶中【zhōng】培【péi】养【yǎng】，传代达到细胞生长状态【tài】良好时，再进行冻存【cún】。具体【tǐ】操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。