永生型大鼠肝储脂细胞（HSC-T6）

永生型大鼠肝储脂细胞(HSC-T6)
细胞特性
1)来源：大鼠
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶【píng】或者lmL冻存管包【bāo】装运输和保【bǎo】存：使用【yòng】含【hán】有胎牛血清【qīng】的【de】2ml冻存管发送存【cún】活细胞。
收到细胞后，可在1000RPM，常温条【tiáo】件【jiàn】下，离心5min后，于【yú】洁净操【cāo】作台弃去上清，加【jiā】入推【tuī】荐【jiàn】使用的培养基后转移至l〇cm培养皿或者T25培养瓶中培养【yǎng】，传代达【dá】到细胞【bāo】生【shēng】长状态良好时【shí】，再进【jìn】行冻存。具【jù】体操作见细胞培养步骤【zhòu】。
 
细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备DMEM培【péi】养基(GIBCO)，90%;胎牛血清【qīng】，10%。培【péi】养条件：气相：空气，95%;二氧化【huà】碳，5%。温度：37摄氏度，培养【yǎng】箱【xiāng】湿【shī】度为70%-80%。
2. 冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用【yòng】现配【pèi】。液氮储【chǔ】存。
2)细胞处理：
 
永生型大鼠肝储脂细胞(HSC-T6)复苏细胞：将含【hán】有lmL细胞悬液的冻存管在【zài】37°C水浴中【zhōng】迅速摇晃解【jiě】冻，加入4mL培养基混合均匀。在【zài】1000RPM条件下离心4分钟，弃去【qù】上清液，补加【jiā】l-2mL培【péi】养【yǎng】基后吹匀。然后【hòu】将【jiāng】所【suǒ】有【yǒu】细胞悬液加入培【péi】养瓶中培养【yǎng】过夜（或将
细胞悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。
第二天换液并检查细胞密度。
 
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁【bì】细胞，传代可参考以下方法【fǎ】：弃去培养【yǎng】上清，用不含【hán】钙、镁【měi】离子【zǐ】的【de】PBS润洗细胞9-21次。
力口 2m丨消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中【zhōng】，置【zhì】于【yú】37°C培养箱中【zhōng】消化【huà】9-21分钟，然后在显【xiǎn】微镜下观察细胞消【xiāo】化情况，若细【xì】胞大部分变圆并脱落【luò】，迅速【sù】拿回操作【zuò】台，轻敲几【jǐ】下培养瓶后加少量【liàng】培养基终【zhōng】止消化。
按6-8ml/瓶补【bǔ】加培【péi】养基，轻轻打匀后吸出【chū】，在1000RPM条件下离心4分钟，弃【qì】去上清【qīng】液，补加【jiā】l-2mL培养液后【hòu】吹匀。
 将细【xì】胞悬液按1: 2到【dào】1: 5的比例分到新的含8ml培【péi】养基的新皿中【zhōng】或者【zhě】瓶中。
细胞冻存：待【dài】细【xì】胞生【shēng】长状态良【liáng】好时，可进【jìn】行【háng】细胞冻【dòng】存。贴壁细胞冻【dòng】存时，弃【qì】去培【péi】养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后【hòu】，加【jiā】入约lml含血清的培【péi】养【yǎng】基后加入冻存管中，再添加【jiā】1〇%DMSO后进行冻存。
 
永生型大鼠肝储脂细胞(HSC-T6)注意事项：
收到细胞【bāo】后，若发现干【gàn】冰【bīng】己挥发【fā】干净、冻存管【guǎn】瓶【píng】盖脱落、破损【sǔn】及细胞有污染，请立即与我们电联。所有动物细胞均视【shì】为有潜在的生物危害性，必须在二级【jí】生物【wù】安【ān】全台内操【cāo】作，并请注意防护，所【suǒ】有废【fèi】液及接触【chù】过此细胞【bāo】的器皿需要灭菌后方【fāng】能【néng】丢弃。