大鼠肾细胞（NRK-52E）

大鼠肾细胞(NRK-52E)
细胞特性
1)来源：大鼠，正常肾
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在【zài】显【xiǎn】微镜【jìng】下确【què】认细胞【bāo】生长状态，去掉封口【kǒu】膜并将T25瓶置【zhì】于37°C培养约2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4. 如果细胞【bāo】长满（90%以上）请及时进行细胞传代【dài】，传代培养用6ml本公【gōng】司附带【dài】的*培养【yǎng】基。
5.接【jiē】到细胞次日【rì】，请检查细胞是【shì】否污【wū】染，若发现污染【rǎn】或疑似污【wū】染，请及时与我们取【qǔ】得【dé】电联。
细胞用途：仅供使用。
 
大鼠肾细胞(NRK-52E)本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】 DMEM 培养基(DMEM，GIBCO)，95%;小牛血清，5%，添加【jiā】 10ng/ml EGF+4mM L-Glucose。
2.培养条件：气相：空气，95%;二【èr】氧【yǎng】化碳【tàn】，5%。温度：37C，培【péi】养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻【dòng】存【cún】管迅速放入37°C水浴中（水面要低于【yú】冻存管盖【gài】部【bù】）摇晃解冻，移入事先准【zhǔn】备好的【de】含有4mL培养基【jī】的15ml离心管【guǎn】中混合【hé】均【jun1】匀。在1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟【zhōng】，弃去上清液，加入lmL培
养基【jī】后吹匀。然后【hòu】将所有细胞悬液移入含有【yǒu】5ml培养基【jī】的培养【yǎng】瓶中培养过夜。
第二天换液并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细【xì】胞，传代可参考以【yǐ】下方法：弃去培养上清，用【yòng】不含【hán】钙、镁【měi】离【lí】子的【de】PBS润洗细胞9-21次。
力口 2m丨消【xiāo】化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置于37C培养箱中消化9-21分钟，然【rán】后在显微镜下观察细【xì】胞消化【huà】情况，若细胞大【dà】部分变圆并脱【tuō】落，迅【xùn】速【sù】拿回操作台，轻敲几下培【péi】养瓶后加入【rù】3ml此【cǐ】细胞的
培养基终止消化。
轻【qīng】轻吹打【dǎ】后吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离【lí】心4分钟弃去上【shàng】清液【yè】，加入lmL培养液后吹匀【yún】。
移入到【dào】事先准备好的含有5ml培养【yǎng】基的T-25培【péi】养【yǎng】瓶【píng】中或含有14ml培养基的T-75培养【yǎng】瓶中培养【yǎng】。
 
细胞【bāo】冻存：待【dài】细胞生长状态良好时，可【kě】进【jìn】行【háng】细【xì】胞冻存。贴【tiē】壁细胞冻存时，先【xiān】要消化处理【lǐ】并进行细胞计数。消化方【fāng】法按照细胞传【chuán】代方法的9-21步骤进行，后的【de】重悬液使用【yòng】血【xuè】清【qīng】。悬浮【fú】细胞直接计数后离心，用血清重悬浮，加DMS至终浓度为10%。加【jiā】入【rù】DMSO后【hòu】迅速混匀，按每lml的【de】数量【liàng】分配到冻【dòng】存管中。本公司【sī】按每个冻存管细胞【bāo】数目大于【yú】1X106个细胞冻存。
 
大鼠肾细胞(NRK-52E)注意事项：
收到【dào】细胞【bāo】后，若发现干冰己挥【huī】发干净、冻存【cún】管瓶盖【gài】脱落、破损及【jí】细【xì】胞有污染，请立即与我们电联。
所有【yǒu】动【dòng】物【wù】细胞均视为有【yǒu】潜在的生物【wù】危害【hài】性，必须在二【èr】级生物安全台内操作，并【bìng】请注【zhù】意防护，所有废液及接触【chù】过此细胞的器皿【mǐn】需要灭菌后方能【néng】丢弃。