大鼠肾小球系膜细胞（HBZY-1）

大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)
细胞介绍
大【dà】鼠肾小球系膜细【xì】胞，贴壁生长，常【cháng】用于发生机理的【de】临床【chuáng】研究，也可用干构建动物摸型【xíng】。
 
细胞特性
1)来源：大鼠肾
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管【guǎn】包装运输和保存：使用含有胎牛【niú】血清的2ml冻【dòng】存管发送【sòng】存【cún】活细胞。
收到【dào】细胞后【hòu】，可在1000RPM，常【cháng】温条件【jiàn】下，离心5min后【hòu】，于洁净【jìng】操作台弃去上清，加【jiā】入【rù】推【tuī】荐【jiàn】使用的培养基后转移至l〇cm培养皿者T25培【péi】养瓶中【zhōng】培养，传代【dài】达到细胞生长状态良好时，再进【jìn】行冻存。具体操作【zuò】见细【xì】胞培养步骤【zhòu】。
细胞用途：仅供使用。
 
大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】DMEM培养【yǎng】基(DMEM，GIBCO)，90%;北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号【hào】 16000-044)，10%。
2.培【péi】养条件：气相：空【kōng】气，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度：37摄氏度。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存
 
2)细胞处理：
1.复【fù】苏细胞：将含有lmL细胞悬【xuán】液【yè】的【de】冻存管在37°C水浴中【zhōng】迅【xùn】速摇【yáo】晃解冻，加入4mL培养基混合均【jun1】匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液【yè】，补加l-2mL培养【yǎng】基后吹匀【yún】。
然后将【jiāng】所【suǒ】有细胞悬液加入培【péi】养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培【péi】养【yǎng】基【jī】，培【péi】养过夜）。
第二天换液并检查细胞密度。
2.细胞传代【dài】：如果细胞【bāo】密度达80%-90%，即可进行传代培养【yǎng】。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培【péi】养上清，用不【bú】含钙、镁【měi】离子的PBS润洗细胞9-21次。力口 2m丨消【xiāo】化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培【péi】养瓶中，置于37°C培养箱中消化9-21分钟，然后【hòu】在显微镜下观察细胞【bāo】消【xiāo】化情况，若细胞【bāo】大部分变圆并脱【tuō】落，迅【xùn】速【sù】拿回操作台，轻敲几下培养瓶后【hòu】加少量培养【yǎng】基终止消化。按6-8ml/瓶补加【jiā】培养基，轻轻打【dǎ】匀后吸【xī】出，在1000RPM条件下【xià】离心4分钟，弃去上清液，补【bǔ】加l-2mL培养【yǎng】液后【hòu】吹匀。将细胞悬液按1: 2到1: 5的【de】比例【lì】分【fèn】到新的含8ml培养【yǎng】基的新皿【mǐn】中或【huò】者
3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细胞冻存【cún】时【shí】，弃去培养基后【hòu】，PBS清洗【xǐ】瓶底【dǐ】9-21次后加入lml胰酶，细胞【bāo】变圆脱落后，加入2ml*培养基终止【zhǐ】消化，可使用血球计数板计数。lOOOrpm离心4min去掉【diào】上清。用【yòng】血【xuè】清重悬浮，加DMSO至终浓度为10%。
加入【rù】DMSO后迅【xùn】速【sù】混匀，按每lml的【de】数量分配到【dào】冻【dòng】存管中，注意【yì】冻存管做好标识。本公司【sī】按每个冻存管细胞【bāo】数目大于【yú】1X106个细胞冻【dòng】存。将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后【hòu】转入液氮灌【guàn】储存。
记录冻存管位置以便下次拿取。
 
大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)注意事项：
收到细胞【bāo】后，若【ruò】发现干冰己挥【huī】发干【gàn】净、冻【dòng】存管瓶盖脱【tuō】落、破【pò】损及细胞有污染，请【qǐng】立即与我们电联。
所有动【dòng】物细胞均【jun1】视为有潜【qián】在的生【shēng】物危害【hài】性【xìng】，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有【yǒu】废【fèi】液及接【jiē】触过此细胞的【de】器皿需【xū】要灭菌后【hòu】方能丢弃瓶中。