大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（髙分化）PC-12

大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（髙分化）PC-12
细胞介绍：
该细胞系【xì】来自能【néng】移植的雄性大鼠【shǔ】肾上【shàng】腺嗜铬细【xì】胞瘤。这些细胞表达【dá】神经【jīng】生长因子(NGF)受体。NGF可诱导产【chǎn】生神经表型。这些【xiē】细胞不合成【chéng】肾上腺素。
  
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基(RPMI-1640:GIBCO)，85%;马血【xuè】清 10%胎牛血清【qīng】5%。
2.培养条件：气【qì】相：空气，95%;二氧【yǎng】化【huà】碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿【shī】度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现【xiàn】用现配。液氮【dàn】储存。
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液【yè】的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃【huǎng】解冻，入4mL培【péi】养基混合均匀。在【zài】1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟，弃去【qù】上【shàng】清液【yè】，补【bǔ】加l-2mL培养基【jī】后吹匀。然后将所有细【xì】胞悬液加入培养瓶【píng】中培养过【guò】夜（或将细胞悬液加【jiā】入l〇cm皿中【zhōng】，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天【tiān】换液并检
查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即【jí】可【kě】进行传代培养【yǎng】。对于贴壁细胞，传代可【kě】参考【kǎo】以下方法：弃去培养上清【qīng】，用【yòng】不含钙、镁离子的【de】PBS润洗细胞9-21次。力口2m丨【shù】消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置于37°C培养箱中消化【huà】9-21分【fèn】钟，然后在显微镜下观察细胞消化情【qíng】况，若细【xì】胞大部分变圆并脱落，迅速拿回【huí】操作台，轻【qīng】敲几下培养瓶【píng】后加【jiā】少量培养基终止消【xiāo】化【huà】。
按6-8ml/瓶【píng】补加培【péi】养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条【tiáo】件下离心4分弃去上清液，补加l-2mL培养液【yè】后吹【chuī】匀【yún】。
将【jiāng】细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培【péi】养基【jī】的【de】新皿中或者瓶【píng】中。细胞冻存：待细胞生长状【zhuàng】态良好时，可【kě】进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去【qù】培养基后加【jiā】入【rù】少量胰酶，细胞变圆【yuán】脱落【luò】后【hòu】，加入约【yuē】lml含血【xuè】清的培养基后
加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻存。
  
大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（髙分化）PC-12注意事项：
收到细胞后，若【ruò】发现干冰己【jǐ】挥发【fā】干净、冻【dòng】存管瓶盖脱落【luò】、破损【sǔn】及细胞有污染，请即与我们电联【lián】。
所有动物细胞均视【shì】为有潜在的生物危害性，必须【xū】在【zài】二级【jí】生【shēng】物安全【quán】台【tái】内操作，并请注意防护【hù】，所有废【fèi】液及接触【chù】过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢【diū】弃。
  
细胞特性：
1)来源：肾上腺嗜铬细胞瘤
2)形态：多角形
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（髙分化）PC-12运输和保存：使用含有胎【tāi】牛血清【qīng】的2ml冻存管发送存活细胞【bāo】。收到细胞后，可【kě】在【zài】1000RPM，常温【wēn】条【tiáo】件下，离心5min后，于【yú】洁【jié】净操作【zuò】台弃去上【shàng】清【qīng】，加入推荐使【shǐ】用的培养基后转移至l〇cm培养皿或者T25培养【yǎng】瓶中培养，传代达到细胞【bāo】生长【zhǎng】状态良好时，再【zài】进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。细【xì】胞【bāo】用途：仅【jǐn】供使用【yòng】。