大鼠肝癌细胞（RH-35）

大鼠肝癌细胞(RH-35)
细胞介绍
RH-35细胞【bāo】株源自由N-2feuorenyldiuctamid在雄【xióng】性AxC大【dà】鼠中【zhōng】诱导的可移植Reulier H-35肝癌。细【xì】胞较【jiào】小，饥饿24小时可以使其同【tóng】步。
 
细胞特性
1)来源：大鼠，肝癌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和保【bǎo】存：使用含有【yǒu】胎牛【niú】血清的2ml冻存管发【fā】送【sòng】存活细【xì】胞。收到细【xì】胞后【hòu】，可在【zài】1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁【jié】净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至l〇cm培养皿【mǐn】或者T75培养【yǎng】瓶中培养，传【chuán】代【dài】达到细胞生【shēng】长状态良好【hǎo】时【shí】，再进行冻存【cún】。具体【tǐ】操作见细胞培养步骤【zhòu】。细胞用【yòng】途：仅供使用。
 
大鼠肝癌细胞(RH-35)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】 DMEM-H 培【péi】养基(DMEM-H，GIBCO添加 NaHC031.5g/L)，90%;胎牛血【xuè】清【qīng】，10%。（DMEM 液体培养基【jī】：GIBCO，11995-065)。
2. 培【péi】养条件：气【qì】相【xiàng】：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培【péi】养【yǎng】基，10%DMSO,现用现【xiàn】配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细【xì】胞【bāo】：将含有lmL细胞【bāo】悬液【yè】的冻存管在37°C水浴中迅速摇【yáo】晃解冻，加【jiā】入4mL培养基【jī】混合均匀【yún】。在1000RPM条【tiáo】件下离心【xīn】4分钟，弃去上清液，补加【jiā】l-2mL培养基后吹匀。然后将【jiāng】所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或【huò】将
细【xì】胞悬液加入【rù】l〇cm皿中【zhōng】，加【jiā】入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
 
细胞传代：
如【rú】果细胞密度【dù】达80%-90%，即可进行传代培【péi】养。对于贴壁细【xì】胞【bāo】，传代可参考以下方【fāng】法【fǎ】：
弃去培养上清【qīng】，用不含钙、镁离【lí】子【zǐ】的PBS润洗细胞9-21次。力口 2m丨消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养【yǎng】瓶中，置【zhì】于37°C培养【yǎng】箱中【zhōng】消化9-21分钟，然后在显【xiǎn】微镜下观察细胞消化情况，若细胞大【dà】部分变圆并脱落【luò】，迅速拿回操作【zuò】台，轻【qīng】敲几下培【péi】养瓶后【hòu】加少量培养【yǎng】基终止消化。按6-8ml/瓶补加培【péi】养基【jī】，轻【qīng】轻打匀后【hòu】吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养液后吹匀。
将细【xì】胞【bāo】悬液按1: 2到【dào】1: 5的比例分到新的含8ml培养基【jī】的新皿中【zhōng】或者。
细胞冻存：待细【xì】胞生长状【zhuàng】态良好【hǎo】时【shí】，可进【jìn】行细胞冻【dòng】存。贴【tiē】壁细胞冻存【cún】时，弃去培养基后加入少量胰酶【méi】，细胞【bāo】变圆脱落后，加入约lml含血清的【de】培养基后加入冻存管中，再添【tiān】加1〇%DMSO后进【jìn】行冻存。
 
大鼠肝癌细胞(RH-35)注意事项：
收【shōu】到细胞后【hòu】，若发现干冰己挥【huī】发【fā】干净、冻存管【guǎn】瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请【qǐng】立即与我们【men】电联。
所有【yǒu】动物细胞均【jun1】视为有潜在的生【shēng】物危害【hài】性，必须在二级生物【wù】安全台内【nèi】操作，并请注【zhù】意防护，所有【yǒu】废液及接触过此细胞的器【qì】皿需【xū】要灭菌【jun1】后方能丢弃【qì】，瓶中。