小鼠正常肝细胞（NCTC 1469）

小鼠正常肝细胞(NCTC 1469)
细胞介绍
1952年建系，源于正常【cháng】C3H/An小鼠【shǔ】的【de】肝脏组织，表达H-2K抗原【yuán】，鼠痘病毒【dú】阴性。细胞特性
1)来源：小鼠的肝组织
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显微镜下确认细胞生长状态【tài】，去【qù】掉封【fēng】口膜并【bìng】将T25瓶置于【yú】37°C培养约2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如【rú】果细胞长满（90%以【yǐ】上）请及时进行【háng】细胞传【chuán】代，传代培养用6ml本【běn】公司【sī】附【fù】 带的*培养基。
5.接到【dào】细胞【bāo】次日【rì】，请检查【chá】细胞是否污染，若【ruò】发现污染【rǎn】或疑似污染，请及时与我 们取【qǔ】得电【diàn】联。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠正常肝细胞(NCTC 1469)本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备DMEM培养基(DMEM，GIBCO);马血清，10%;双抗【kàng】
1%。
2.培养条件【jiàn】：气【qì】相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37°C，培养箱湿度为【wéi】70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏细胞：将【jiāng】含有lmL细【xì】胞悬液的冻存管迅速放【fàng】入37°C水浴【yù】中（水面要低 于【yú】冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上【shàng】清液，加入【rù】lmL培【péi】养基【jī】后吹匀。然后【hòu】将所有【yǒu】细胞悬液【yè】移【yí】入含有5ml培【péi】养基的【de】培【péi】养【yǎng】瓶中培养过夜【yè】。 第二【èr】天换液并检查【chá】细胞【bāo】密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次。
力【lì】口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置【zhì】于【yú】37°C培
养【yǎng】箱中消化9-21分钟，然后在显微镜下观察细【xì】胞消化情况，若细胞【bāo】大【dà】部 分【fèn】变圆并脱落【luò】，迅速拿【ná】回操作台，轻敲几下培养瓶后加入【rù】3ml此【cǐ】细胞的 培养【yǎng】基终止消化【huà】。
轻轻吹【chuī】打后【hòu】吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下【xià】离心4分【fèn】钟， 弃去上【shàng】清液，加入lmL培养液【yè】后吹匀。
移【yí】入到【dào】事先准备好【hǎo】的含有5ml培养基的T-25培养瓶中【zhōng】或【huò】含有14ml培【péi】养 基的T-75培养【yǎng】瓶中培养。
细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细胞冻存时，弃【qì】去【qù】培养基后【hòu】，PBS清洗瓶底9-21次后加入lml胰【yí】酶，细 胞变圆脱【tuō】落后，加入2ml*培养基终【zhōng】止消化，可使用血【xuè】球计数板计数【shù】。
1000RPM离心5分钟去掉【diào】上清。用血【xuè】清【qīng】重悬浮【fú】，加【jiā】DMSO至终浓度为 10%。加入DMSO后迅速混【hún】匀，按每lml的数量分配到冻【dòng】存管中，注【zhù】意冻存 管做【zuò】好【hǎo】标识【shí】。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞【bāo】冻存【cún】。
将冻存管置于程【chéng】序降温盒中，放【fàng】入-80度【dù】冰箱，至【zhì】少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻【dòng】存【cún】管位【wèi】置【zhì】以便下次拿取。
 
小鼠正常肝细胞(NCTC 1469)注意事项：
收到细【xì】胞后，若发现干冰己挥发干净【jìng】、冻存【cún】管瓶盖脱落、破【pò】损及细胞有污染，请立即【jí】与我们电【diàn】联。
所有【yǒu】动物【wù】细胞均视为有潜【qián】在的【de】生物危害性，必须在二级生【shēng】物安全台内操【cāo】作，并请【qǐng】注意防护，所有废【fèi】液及接触过此细胞的器皿【mǐn】需要灭菌【jun1】后方能丢【diū】弃。