小鼠视网膜神经节细胞（RGC-5）

小鼠视网膜神经节细胞(RGC-5)
细胞特性
1)来源：小鼠
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和【hé】保存【cún】：使用含有胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收【shōu】到细胞后，可在1000RPM，常温【wēn】条件下【xià】，离【lí】心【xīn】5min后，于洁净操【cāo】作台弃去上清，加入推荐【jiàn】使【shǐ】用的培【péi】养【yǎng】基后转移至l〇cm培养皿或【huò】者T25培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态【tài】良好时，再进行冻存【cún】。具体【tǐ】操作见细胞培养步骤【zhòu】。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠视网膜神经节细胞(RGC-5)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.F-12(GIBCO)，90%;北美胎【tāi】牛【niú】血清(United States，GIBCO，货【huò】号16000-044)，10%。
2.培养条件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温【wēn】度：37摄氏度，培【péi】养箱湿度为【wéi】70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将【jiāng】含【hán】有lmL细胞悬液的冻【dòng】存管在【zài】37°C水浴【yù】中迅速摇晃解【jiě】冻，加【jiā】入4mL培【péi】养基【jī】混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养【yǎng】基【jī】后【hòu】吹【chuī】匀。然后将所【suǒ】有细胞悬【xuán】液【yè】加入培养瓶中培养【yǎng】过【guò】夜（或将细胞悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二【èr】天换液并【bìng】检 查细【xì】胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次。
力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培
养箱【xiāng】中消【xiāo】化9-21分【fèn】钟【zhōng】，然后在显【xiǎn】微【wēi】镜下观察细胞消化情况，若细胞【bāo】大部分变圆并【bìng】脱落，迅速拿回【huí】操作台【tái】，轻敲几下培养瓶后加少量【liàng】培养基终止消化【huà】。
按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打【dǎ】匀后吸出，在1000RPM条【tiáo】件下离心【xīn】4分钟，弃去上清液，补加【jiā】l-2mL培【péi】养液后吹匀。
将细【xì】胞【bāo】悬液按【àn】1: 2到1: 5的比例分到新【xīn】的含8ml培养基的新【xīn】皿中或【huò】者瓶中。
 
细胞冻存：待细胞生【shēng】长【zhǎng】状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，先要【yào】消【xiāo】化【huà】处理并进行细胞计数。消化方法按【àn】照细胞【bāo】传代方法的9-21步骤进行，后【hòu】的重悬液使用血【xuè】清。加DMSO至终【zhōng】浓度为【wéi】10%，加入【rù】DMSO后【hòu】迅速混 匀，按每lml的【de】数量【liàng】分配到【dào】冻存管中【zhōng】。本公司【sī】按每【měi】个冻存管细胞数【shù】目【mù】大【dà】于【yú】 1X106个细胞冻存。
 
小鼠视网膜神经节细胞(RGC-5)注意事项：
收到细胞后，若发现干冰【bīng】己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损【sǔn】及细胞【bāo】有污染，请立即与我【wǒ】们【men】电【diàn】联。
所有动物细【xì】胞均视【shì】为有潜在的生【shēng】物【wù】危【wēi】害性，必【bì】须在二级生【shēng】物安全台内操作【zuò】，并请注意防护，所【suǒ】有废液及接触【chù】过此细胞的器皿需要【yào】灭菌后方能丢弃。