小鼠畸胎瘤细胞（P19）

小鼠畸胎瘤细胞(P19)
细胞介绍
加拿大渥【wò】太华大【dà】学的Me Burney等在1982年从【cóng】雄性小【xiǎo】鼠畸胎瘤中分离得到的，是一种能够在体【tǐ】外培养的多能【néng】干细胞,P19细胞团经RA诱导可分化成神经元、胶质细胞【bāo】和纤维【wéi】母细【xì】胞；而经二甲基亚砜(DM SO)诱导则分化成【chéng】心肌、骨骼【gé】肌【jī】和平滑肌【jī】细【xì】胞;在P19细胞【bāo】向神【shén】经【jīng】元分化的过程中【zhōng】，神经发育相关【guān】基因的表达模式 基本模拟了正常小【xiǎo】鼠神【shén】经发育过程，因此【cǐ】,P19目前被用作一【yī】个研究神经发【fā】育的 体【tǐ】外模型。P19细【xì】胞作为研【yán】究【jiū】神【shén】经分化机【jī】制的【de】模型，显著区【qū】别于其他细胞系的四 大【dà】特点【diǎn】是：①它具有正常小鼠【shǔ】的【de】二倍体核型，细胞【bāo】分裂快，可【kě】在体外迅速【sù】大量【liàng】扩 增，多次传代也不【bú】丧失其分化能【néng】力。②P19细胞【bāo】具【jù】有【yǒu】多种【zhǒng】分【fèn】化【huà】潜【qián】力，不同【tóng】诱导条【tiáo】 件下可【kě】定向分化成不同类【lèi】型的【de】细胞【bāo】，种植到孕鼠【shǔ】囊胚中能分化成【chéng】多种类型细胞。 ③根据P19细【xì】胞诱导分化分【fèn】阶段【duàn】进行的【de】特【tè】点，能【néng】将神经分化的早期机制与参与 突起延伸的机制分开研究。④该细胞【bāo】易于转【zhuǎn】染，且转染后仍【réng】能正常分化，适于进 行细胞基因【yīn】研究。通过转【zhuǎn】染正常或【huò】突变的目的基因，增【zēng】强或抑制它们的表达水平 可用于【yú】研究这些【xiē】基因在神经分化中【zhōng】的作用。另【lìng】外，利用反【fǎn】义RNA阻断【duàn】内源蛋白 的表达，可用来观察这些蛋【dàn】白在神经分化中【zhōng】的作用【yòng】。
(references:
1.张金平【píng】等.全反式维甲酸体【tǐ】外诱导P19细胞向【xiàng】心肌方向分【fèn】化.[」]中【zhōng】国组【zǔ】织化学与【yǔ】 细胞化学杂志.2012.1
2.梅宇钦等.建【jiàn】立经优化的促P19鼠胚胎癌细胞神经【jīng】分化模型【xíng】.浙【zhè】江大【dà】学学报（医 学【xué】版）2012.04)
 
细胞特性
1)来源：胚胎；崎胎癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输【shū】和保存：可选择干冰运输及发送复苏存【cún】活细胞方【fāng】式：（1)干冰运输【shū】，收到后 立即【jí】转入液氮冻存或直【zhí】接复苏；（2)存活细胞，收到【dào】后应继续【xù】生长，传代达【dá】到细 胞生长状态良好【hǎo】时【shí】，再【zài】进行冻存。具【jù】体操作见细胞培【péi】养【yǎng】步骤。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠畸胎瘤细胞(P19)细胞培养步骤
一.培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】MEMa培养【yǎng】基(MEMa+培养基(GIBCO,添加NaHC〇31.5g八，肌醇43.2mg八，叶酸8.82mg八,0-巯基【jī】乙醇7.8mg八【bā】)，90%; BCS，7.5%;胎牛【niú】血清，2.5%。
2. 培养条件：气【qì】相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱【xiāng】湿【shī】度【dù】为70%-80%。
3.冻存液【yè】：90%*培养【yǎng】基，10%DMSO,现用现【xiàn】配。液氮储存。
二.细胞处理：
复苏细【xì】胞：将【jiāng】含有1mL细【xì】胞悬液的冻【dòng】存管在37°C水浴中迅速摇【yáo】晃【huǎng】解【jiě】冻，加入【rù】4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下【xià】离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基【jī】后吹匀。然后【hòu】将【jiāng】所有【yǒu】细胞悬液加入【rù】培养瓶中培养过【guò】夜【yè】（或将细胞悬液加入10cm皿【mǐn】中【zhōng】，加入约8ml培【péi】养基，培养过【guò】夜）。第二天换液并【bìng】检 查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃【qì】去【qù】培养【yǎng】上【shàng】清，用不含钙、镁离子的PBS润【rùn】洗细胞9-21次。
2■加2ml消化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置于37C培
养箱【xiāng】中消化9-21分钟，然后在显【xiǎn】微【wēi】镜下观察【chá】细【xì】胞消化情况，若细胞【bāo】大部分变圆并【bìng】脱落，迅速【sù】拿回操作台，轻敲几【jǐ】下培养瓶后加少量培养基【jī】终止【zhǐ】消化。
3.按【àn】6-8ml/瓶补加培养基，轻【qīng】轻打匀【yún】后吸出【chū】，在1000RPM条件下离心【xīn】4分钟【zhōng】，弃去上【shàng】清液，补加1-2mL培养液后吹匀【yún】。
4.将【jiāng】细胞悬液按1：2到【dào】1：5的【de】比例分到新的含8ml培养【yǎng】基【jī】的新皿中或者瓶中。
 
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一【yī】：收集【jí】细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃【qì】去上清液，补加1-2mL 培养液【yè】后吹匀，将细【xì】胞【bāo】悬液按1：2到【dào】1：5的比例分到新的含8ml培养【yǎng】基的新皿中或【huò】者瓶中。
方法二：可选择半数【shù】换液方式，弃去【qù】半数培养基后，将剩余细胞【bāo】悬起，将【jiāng】细胞【bāo】悬液按【àn】1：2到1：3的比【bǐ】例【lì】分到【dào】新的含【hán】8ml培养基的新【xīn】皿中或者瓶中。
 
细【xì】胞冻存：待细胞【bāo】生长状【zhuàng】态良【liáng】好时，可【kě】进行细胞冻存。贴【tiē】壁细【xì】胞【bāo】冻【dòng】存时，弃去培养基后加入少量【liàng】胰酶，细胞变圆脱落【luò】后，加入约【yuē】1ml含血清的培【péi】养【yǎng】基后【hòu】加入冻存管【guǎn】中，再添加10%DMSO后【hòu】进行【háng】冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟，少量保存上清【qīng】液【yè】（防止细胞吸走)，加 入部【bù】分新鲜培养【yǎng】基【jī】，加【jiā】入到冻存管中，在【zài】冻存管中加入10%DMSO后【hòu】进行冻 存。
 
小鼠畸胎瘤细胞(P19)注意事项：
收到细胞后，若发【fā】现【xiàn】干冰【bīng】已挥发干净、冻存管【guǎn】瓶盖脱【tuō】落、破损及细胞有【yǒu】污染，请立即与我【wǒ】们电联。
所有动物细胞均视【shì】为有潜在的生物危害【hài】性，必须在二级【jí】生【shēng】物安全台内操作，并【bìng】请注意防【fáng】护【hù】，所有废液【yè】及接触过此【cǐ】细胞的【de】器皿需要灭菌后【hòu】方能【néng】丢弃。