小鼠胚胎细胞（NIH/3T3）

小鼠胚胎细胞(NIH/3T3)
细胞介绍
与原始的【de】随机交配【pèi】3T3和近交系BALB/c 3T3建株方法一样，NIH/3T3，是从MH Swiss小鼠胚胎培养物中建立的高度接触【chù】抑【yì】制的连续细胞株。为了培育【yù】在形态学 特征【zhēng】上【shàng】更【gèng】适合于进行转化分【fèn】析的亚【yà】株，建【jiàn】立的MH/3T3细【xì】胞株又【yòu】进行了五轮【lún】以【yǐ】上亚【yà】克隆。这株细胞对DNA转化【huà】及转染研【yán】究十分有用。检测表明肢骨发育畸【jī】形病 毒(鼠【shǔ】痘)阴性。
 
细胞特性
1)来源：胚胎
2)形态：成纤维细胞
3)含量：>lxl06个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输【shū】和保存：使【shǐ】用含有【yǒu】胎牛【niú】血清的2ml冻存管发送存【cún】活细胞。收到细胞【bāo】后，可在【zài】1000RPM，常温【wēn】条件下，离【lí】心5min后，于洁净操【cāo】作台弃去【qù】上清，加入【rù】推荐使用的培养基后转移至l〇cm培【péi】养皿或者T25培养瓶中【zhōng】培【péi】养，传代达到细【xì】胞生长状态良好时，再进行冻【dòng】存。具体操【cāo】作见细胞培【péi】养步骤。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠胚胎细胞(NIH/3T3)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1. 准备DMEM培养基(DMEM，GIBCO)，北美胎牛血【xuè】清，15%，1% PS。
2. 培养【yǎng】条件：气相：空气【qì】，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培【péi】养箱湿度【dù】为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
1.复苏【sū】细【xì】胞：将含有lmL细【xì】胞悬液的冻【dòng】存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻，离心管加入4mL培【péi】养基混合【hé】均匀【yún】。在800-1000RPM条件下离心9-21分钟【zhōng】，弃去上【shàng】清【qīng】液，补加l-2mL培养基【jī】后吹匀。然后将【jiāng】所【suǒ】有细【xì】胞悬液加入T25培【péi】养瓶中【zhōng】 培养，补加培养【yǎng】基【jī】至6ml。
2.细胞传代【dài】：如【rú】果细胞密度达【dá】80%-90%，即可进行传【chuán】代培养。
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次。
力口 lm丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培【péi】养箱中消化【huà】9-21分钟，然后在【zài】显【xiǎn】微【wēi】镜下观【guān】察细胞消化情况【kuàng】，若细胞大部分变圆并【bìng】脱落，迅速拿【ná】回操作台，轻【qīng】敲几下培【péi】养瓶后加【jiā】2ml*培养基终止消化。
轻轻打匀后吸出【chū】，在1000RPM条件下离心5分【fèn】钟，弃去上清液，加l-2mL 培养液【yè】后【hòu】吹【chuī】匀。
将细胞悬液按1:2到1:5比例分到新的含6ml培养基【jī】的【de】新皿中【zhōng】或者瓶中。
3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细胞冻存时，弃去培【péi】养基后，PBS清洗瓶底9-21次后加【jiā】入lml胰酶，细胞变圆【yuán】脱【tuō】落后，加入【rù】2ml*培【péi】养基终【zhōng】止消化，可【kě】使用血球计【jì】数板计数。
1000RPM离心5分钟【zhōng】去掉上清。用血【xuè】清重悬浮，加DMSO至终浓度【dù】为 10%。加入DMSO后迅速混【hún】匀，按每lml的数量分配到冻存管中，注【zhù】意冻存 管【guǎn】做好标识【shí】。本公司按每个冻存【cún】管细【xì】胞数目大于【yú】1X106个【gè】细胞冻【dòng】存。
将冻存管置于【yú】程【chéng】序降温盒中，放【fàng】入-80度冰【bīng】箱，至少2个小时以后转入液氮灌【guàn】储存。记录冻【dòng】存管【guǎn】位【wèi】置以便【biàn】下次拿取。
 
小鼠胚胎细胞(NIH/3T3)注意事项：
收到细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落【luò】、破损及细胞【bāo】有【yǒu】污染【rǎn】，请【qǐng】立即与我【wǒ】们【men】电联。
所有动物细胞均视为有潜在的【de】生物危害【hài】性，必须在二级【jí】生物【wù】安全【quán】台内操作，并【bìng】请注意防【fáng】护，所有废【fèi】液及接触过此细胞的器皿需【xū】要灭菌后方能丢【diū】弃。