小鼠足细胞（MPC-5）

小鼠足细胞(MPC-5)
细胞特性
1)来源：小鼠
2)形态：贴壁生长
3)含量：>lxl06个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和保存：使用含有胎牛血清的2ml冻存【cún】管发【fā】送存活细胞。收到细胞后【hòu】，可在1000RPM，常温【wēn】条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去上清，加入推【tuī】荐 使用【yòng】的【de】培养基【jī】后【hòu】转移【yí】至l〇cm培【péi】养皿或者T25培养瓶中培养，传【chuán】代达到细胞【bāo】生长状态良【liáng】好时，再进行冻【dòng】存。具体操【cāo】作见细胞培养【yǎng】步【bù】骤。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠足细胞(MPC-5)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640培养基(RPIVM-1640:GIBCO,添【tiān】加 NaHC031.5g八, D-葡萄糖2.5g八【bā】，丙酮酸钠O.llg八【bā】)，90%;胎【tāi】牛血清，10%。
2.培养【yǎng】条件：气相【xiàng】：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱 湿【shī】度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用【yòng】现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏细胞【bāo】：将含有lmL细胞悬液的冻存【cún】管在37°C水浴中【zhōng】迅速摇【yáo】晃解冻，加入【rù】4mL培【péi】养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去【qù】上清液【yè】，补加【jiā】l-2mL培【péi】养基【jī】后吹匀。然后将所有细胞悬【xuán】液加入培养瓶中培养过夜【yè】（或【huò】将细胞【bāo】悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培【péi】养基，培养过夜）。第【dì】二天换液并【bìng】检【jiǎn】 查细胞密【mì】度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次。
力口2m丨消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中【zhōng】，置于37°C培
养箱【xiāng】中消化9-21分【fèn】钟，然后在【zài】显微镜下观察细胞消化情【qíng】况【kuàng】，若细胞大部分【fèn】变圆并脱【tuō】落，迅速拿回操作台，轻敲【qiāo】几下【xià】培养瓶后加【jiā】少量培养基终止消化。
按6-8ml/瓶补加培【péi】养基，轻轻打匀后吸【xī】出，在1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃【qì】去【qù】上清【qīng】液，补加l-2mL培养液【yè】后吹匀。
将细【xì】胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新的【de】含8ml培养基【jī】的新皿中或【huò】者瓶中。
 
细胞冻【dòng】存：待细胞【bāo】生长状态良【liáng】好时【shí】，可进【jìn】行细胞【bāo】冻存。贴壁【bì】细胞冻存【cún】时，弃【qì】去培养基后加入少【shǎo】量胰酶，细胞变圆脱落后，加入【rù】约lml含【hán】血清的【de】培养基后加入冻存管中【zhōng】，再添加1〇%DMSO后进行冻存。
 
小鼠足细胞(MPC-5)注意事项：
收到细胞后【hòu】，若发现【xiàn】干冰己挥【huī】发【fā】干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细【xì】胞【bāo】有污染，请【qǐng】立即与我【wǒ】们电联。
所【suǒ】有【yǒu】动物细胞均视为有【yǒu】潜在的【de】生物危害性，必须在二【èr】级生物【wù】安全【quán】台内操作，并请注意防护，所【suǒ】有【yǒu】废【fèi】液及接触过【guò】此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。