人结肠腺癌细胞 （CW-2）

人结肠腺癌细胞 (CW-2)
细胞介绍：
来源于结肠癌。CEA阳性，移植于裸鼠可成瘤。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基(RPIVM-1640:GIBCO,,添加【jiā】 NaHC031.5g八, D-葡萄糖2.5g八，丙酮酸钠O.llg八)，90%;胎牛【niú】血清，10%。或DMEM 培养基(GIBCO,添加NaHC031.5g八)，90%;胎牛血清【qīng】， 10%。
2. 培养条件：气相：空【kōng】气，95%;二氧化碳，5%。温度【dù】：37摄氏度，培【péi】养【yǎng】箱湿度【dù】为70%-80%。
3.冻【dòng】存液：90%*培养基，10%DMSO,现用现配【pèi】。液氮【dàn】储存【cún】。
2)细胞处理：
复【fù】苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管在【zài】37°C水浴中迅【xùn】速摇【yáo】晃解冻，加【jiā】入4mL培【péi】养基混合均【jun1】匀。在1000RPM条件下离心【xīn】4分钟【zhōng】，弃去上清液【yè】，补加l-2mL培养基后吹匀【yún】。然后将所【suǒ】有【yǒu】细胞悬【xuán】液加入培养瓶中培养过夜【yè】（或将【jiāng】 细胞【bāo】悬液加入l〇cm皿【mǐn】中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检 查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人结肠腺癌细胞 (CW-2)
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用【yòng】不【bú】含钙、镁离子的PBS润洗【xǐ】细胞【bāo】9-21次【cì】。力口【kǒu】2m丨【shù】消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养瓶中，置于37°C培养箱中消【xiāo】化9-21分钟，然后在【zài】显微镜下观察细胞【bāo】消化情况，若细胞大部分变【biàn】圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几【jǐ】下培【péi】养瓶后加少量培养【yǎng】基终止消化。
按6-8ml/瓶【píng】补【bǔ】加培养【yǎng】基，轻轻打匀后吸出【chū】，在【zài】1000RPM条件下【xià】离【lí】心4分 钟，弃去上清液，补加l-2mL培养液后【hòu】吹匀。将【jiāng】细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分【fèn】到新的含8ml培养基的新皿中【zhōng】或者瓶中。
 
细胞冻【dòng】存：待细胞生【shēng】长【zhǎng】状【zhuàng】态良好【hǎo】时，可进行细【xì】胞【bāo】冻存。贴壁细【xì】胞冻存时，弃【qì】去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱【tuō】落后，加入约lml含血清的培养基【jī】后加入冻存【cún】管中，再添加1〇%DMSO后进行冻【dòng】存。
 
注意事项：
收【shōu】到细胞后，若【ruò】发现【xiàn】干冰己挥发干净、冻存【cún】管瓶盖脱落、破损【sǔn】及细胞有污染，请【qǐng】立即与我【wǒ】们【men】电联。
所有动物细胞均视为有潜【qián】在的生物危害【hài】性，必须【xū】在【zài】二级生物安【ān】全台【tái】内操作，并【bìng】请【qǐng】注【zhù】意【yì】防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌【jun1】后方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：结肠癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人结肠腺癌细胞 (CW-2)运输和保存：使用含有胎牛血清【qīng】的2ml冻存管发送存活细【xì】胞。收【shōu】到细胞后，可【kě】在1000RPM，常温条件下，离心【xīn】5min后，于洁净操作台【tái】弃【qì】去上清【qīng】，加入推荐【jiàn】使【shǐ】用的【de】培【péi】养基后转移至l〇cm培【péi】养皿或者T25培【péi】养【yǎng】瓶【píng】中培养，传代【dài】达到细胞生【shēng】长状态良好时，再进【jìn】行冻存。具体操作见细胞培【péi】养步骤。
细胞用途：仅供使用。