猴胚胎肾上皮细胞（marcl45）

猴胚胎肾上皮细胞(marcl45)
细胞特性
1)来源：肾
2)含量：>lxl06 个/mL
3)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
4)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输【shū】和保存：可【kě】选择干冰运输及发送复【fù】苏【sū】存活细胞方式：（1)干冰运输，收到后【hòu】立即转入液氮冻存或【huò】直接【jiē】复苏；（2)存活细胞，收【shōu】到【dào】后【hòu】应继续生【shēng】长，传【chuán】代达到【dào】细胞生长状态良好时，再进行【háng】冻存。具体操作见【jiàn】细胞培养【yǎng】步骤。
 
细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 D/F12 培养基(D/F12, GIBCO);北美胎牛血清【qīng】(UnitedStates，GIBCO)，10%;双【shuāng】抗 1%。
2.培养条件【jiàn】：气相：空气【qì】，95%;二氧化碳，5%。温度【dù】：37摄氏【shì】度，培【péi】养湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
 
猴胚胎肾上皮细胞(marcl45)2)细胞处理：
1.复苏细胞：将含【hán】有【yǒu】lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻，离【lí】心管【guǎn】加入【rù】4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心【xīn】9-21分钟，弃去上【shàng】清液，补加l-2mL培【péi】养基后【hòu】吹【chuī】句。然后【hòu】将所有细胞悬液加【jiā】入T25培养瓶中培养，加培养基至6ml。
2.细胞传【chuán】代：如果【guǒ】细胞密度达【dá】80%-90%，即可进行传代培养。对【duì】于贴壁细胞，传代可参考以下【xià】方【fāng】法：弃【qì】去培养上清【qīng】，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次【cì】。力【lì】口【kǒu】 lm丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置于【yú】3C培养箱中消化【huà】9-21分钟【zhōng】，然【rán】后在显微镜下观察细胞消化情【qíng】况，若细【xì】胞【bāo】大部【bù】分变圆并脱落，迅速拿【ná】回操作台，轻敲几【jǐ】下【xià】培养【yǎng】瓶后【hòu】加2ml*培养基终【zhōng】止消化。
轻轻【qīng】打匀后吸出，在1000RPM条件下【xià】离心5分【fèn】钟，弃去上【shàng】清液【yè】，加l-2mL培养液后【hòu】吹匀。
将细【xì】胞悬液【yè】按1:2到【dào】1:5比例分到新的含6ml培养【yǎng】基的新皿中或者瓶中。3.细胞冻存【cún】：待细胞生长状【zhuàng】态良好时，可进行【háng】细胞冻存【cún】。
 
下面T25瓶为例；
1.细胞【bāo】冻存时【shí】，弃去【qù】培养基后，PBS清洗瓶底9-21次后加【jiā】入【rù】lml胰酶，细胞变圆脱【tuō】落后【hòu】，加入2ml*培养基【jī】终止消化，可使用【yòng】血球【qiú】计【jì】数板计数。1000RPM离心5分钟【zhōng】去掉上清【qīng】。用血清重悬浮，加DMSO至终浓度为10%。加入DMSO迅速混匀，按每lml的【de】数量分配【pèi】到【dào】冻【dòng】存管【guǎn】中，注意【yì】冻存【cún】管做好标识。本公司【sī】按每个冻存【cún】管细胞数目【mù】大于【yú】1X106个细胞冻存。将冻存管置于程序降温盒中【zhōng】，放入-80度冰箱，至少2个小时【shí】以后转【zhuǎn】入【rù】液氮灌储存【cún】。记【jì】录冻存管位置以便次拿取。
 
猴胚胎肾上皮细胞(marcl45)注意事项：
收到细胞【bāo】后，若发现干冰己【jǐ】挥【huī】发干净、冻存管【guǎn】瓶盖脱落【luò】、破损及细胞有污染【rǎn】，请立即与我们电联。
所有动物细胞【bāo】均【jun1】视为【wéi】有潜【qián】在的【de】生物危害【hài】性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防【fáng】护，所有废液及【jí】接触过此细胞的【de】器皿需【xū】要灭菌后方【fāng】能丢弃。