人巨核细胞白血病细胞 （Dami）

人巨核细胞白血病细胞 (Dami)
细胞介绍：
从【cóng】一【yī】个巨核细胞白血病患者的血液建立了一株【zhū】新【xīn】的【de】人类巨核细【xì】胞(Dami)。此细胞【bāo】悬浮生长为主，倍增时间9-21小时。至【zhì】少89%的【de】细胞【bāo】可与血【xuè】小板糖【táng】蛋白(GP) lb and llb/NIa及血型糖蛋白单克隆【lóng】抗体反应。不与【yǔ】抗淋巴腺、单核细胞、粒性白细 胞、巨噬【shì】细胞抗原的抗体反应。Dami细胞【bāo】为研究【jiū】巨【jù】核细胞【bāo】生化【huà】及分【fèn】化提【tí】供了【le】极 好的模型。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基(RPIVM-1640:GIBCO,添【tiān】加 NaHC03 1.5g/L, D-葡【pú】萄【táo】糖2.5g八【bā】，丙酮酸钠O.llg八)，90%;胎牛血清【qīng】，10%。
2.培养条件：气相：空气，95%;二【èr】氧化碳【tàn】，5%。温度：37摄氏度【dù】，培养箱【xiāng】湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现【xiàn】用【yòng】现【xiàn】配。液【yè】氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细【xì】胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管在【zài】37°C水【shuǐ】浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混【hún】合均【jun1】匀。在1000RPM条件下离心【xīn】4分钟，弃去上清【qīng】液，补【bǔ】加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细【xì】胞悬【xuán】液加【jiā】入培养瓶【píng】中【zhōng】培养过夜（或【huò】将细胞悬液加入【rù】l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培【péi】养【yǎng】过夜）。第二天换【huàn】液并检 查【chá】细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人巨核细胞白血病细胞 (Dami)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上【shàng】清，用不含【hán】钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次。力口2m丨消化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中【zhōng】，置于37°C培养箱中【zhōng】消化【huà】9-21分钟，然后在显微镜下观【guān】察【chá】细【xì】胞消化情况，若【ruò】细胞大部 分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶【píng】后【hòu】加少量培养【yǎng】基终止消化【huà】。按【àn】6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打【dǎ】匀【yún】后吸【xī】出，在1000RPM条件下离心【xīn】4分钟，弃去上【shàng】清液，补加【jiā】l-2mL培【péi】养【yǎng】液后吹匀。将细胞悬液按1: 2到1: 5的【de】比例分到新的含8ml培养基【jī】的新皿中或【huò】者瓶【píng】中【zhōng】。
 
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细【xì】胞【bāo】，1000RPM条件【jiàn】下【xià】离心4分钟【zhōng】，弃去上清液，补加l-2mL培【péi】养液后吹【chuī】匀，将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例【lì】分到新的含8ml培养【yǎng】基的新皿中或者【zhě】瓶中。
方法二：可选【xuǎn】择半数换液方式，弃去【qù】半数培【péi】养【yǎng】基【jī】后【hòu】，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1: 2到1: 3的比例分到新的含8ml培养基的新【xīn】皿中【zhōng】或者【zhě】瓶中。
细胞冻存【cún】：待细【xì】胞生长【zhǎng】状【zhuàng】态良好时，可进【jìn】行细胞冻存。贴【tiē】壁细胞【bāo】冻存【cún】时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变【biàn】圆脱落后，加入【rù】约lml含血清的培养【yǎng】基【jī】后加入冻存管【guǎn】中【zhōng】，再添加1〇%DMSO后进【jìn】行冻存。悬浮细胞【bāo】冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存【cún】上清液（防【fáng】止细胞吸走【zǒu】)，加入部分新鲜【xiān】培养基，加入【rù】到冻存管中【zhōng】，在冻存管中加入【rù】1〇%DMSO后进行【háng】冻存。
 
注意事项：
收到细胞后，若发现干冰己【jǐ】挥发干净【jìng】、冻存管【guǎn】瓶盖脱落、破损【sǔn】及【jí】细胞有污染，请立即与【yǔ】我们电联【lián】。
所有动物细胞均视为有潜在【zài】的生物【wù】危害性【xìng】，必须在二级生物安【ān】全【quán】台内操作，并请注意防护，所有废液及【jí】接触【chù】过此【cǐ】细胞的器皿需要灭【miè】菌后方【fāng】能【néng】丢弃。
 
人巨核细胞白血病细胞 (Dami)细胞特性：
1)来源：巨核细胞白血病
2)形态：巨核细胞
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
运输【shū】和【hé】保存：可选【xuǎn】择干冰【bīng】运输及发送【sòng】复苏存活细【xì】胞方式：（1)干【gàn】冰【bīng】运输【shū】，收到后立即【jí】转入液氮冻【dòng】存或直接复苏；（2)存活细胞，收到后【hòu】应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时【shí】，再进行冻存。具体操作见细胞培【péi】养【yǎng】步骤。
细胞用途：仅供使用。