人脐静脉融合细胞（EA.hy926）

人脐静脉融合细胞(EA.hy926)
细胞介绍：
在PEG胁【xié】迫下，将原代【dài】培养【yǎng】的人脐静脉细胞与抗硫鸟嘌呤【lìng】的A549克隆【lóng】株【zhū】融合【hé】， 构建了人【rén】脐静脉细胞株【zhū】,EA.hy926。融合子在HAT培养基上【shàng】生长并以八因子相关抗原筛【shāi】选。EA.hy926己经过100次以【yǐ】上的群【qún】体倍增(PDLs)。电镜照片显示 Weibel-Palade小【xiǎo】体的细【xì】胞【bāo】质分布【bù】以及组织【zhī】特【tè】异性的细胞【bāo】器，分化【huà】的内皮细胞【bāo】特性 如血管，体内平衡/血栓【shuān】形成，血压及炎症反应。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 DMEM-H 培养【yǎng】基(DMEM-H，GIBCO添加【jiā】 NaHC031.5g/L)， 90%;胎牛血清，10%。（DMEM 液体培【péi】养基：GIBCO)。
2. 培养条件：气相：空气【qì】，95%;二氧化【huà】碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱【xiāng】 湿度为70%-80%。
3.冻存【cún】液：90%*培养【yǎng】基，10%DMSO,现用现【xiàn】配。液氮储【chǔ】存。
 
2)细胞处理：
复苏细【xì】胞：将含有lmL细【xì】胞悬液的冻存管在37°C水【shuǐ】浴中迅速摇晃解冻，加【jiā】入4mL培养基【jī】混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃【qì】去上清液【yè】，补加l-2mL培养【yǎng】基后吹【chuī】匀。然后将所有细胞悬液加【jiā】入培养瓶中培养过【guò】夜（或【huò】将【jiāng】 细胞悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二【èr】天换液【yè】并检【jiǎn】查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人脐静脉融合细胞(EA.hy926)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培【péi】养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞【bāo】9-22次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置【zhì】于【yú】37°C培养箱中消化9-22分钟，然后【hòu】在显微镜下【xià】观察细【xì】胞消【xiāo】化【huà】情况，若细胞大部分变【biàn】圆并【bìng】脱落【luò】，迅速拿回【huí】操作台，轻【qīng】敲几下培养瓶后加少量培【péi】养基终止【zhǐ】消【xiāo】化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻【qīng】轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去【qù】上清液，补加l-2mL培养液后吹【chuī】匀。将细胞【bāo】悬液【yè】按1: 2到1: 5的比例分【fèn】到新的含【hán】8ml培【péi】养【yǎng】基的新皿中或者瓶【píng】中。
细胞冻存：待细胞生长状【zhuàng】态良好【hǎo】时【shí】，可进行细胞冻【dòng】存。贴壁细【xì】胞冻存时，弃去培养【yǎng】基后加入少量胰【yí】酶【méi】，细胞变圆脱【tuō】落后【hòu】，加入约【yuē】lml含血清的培养基后加【jiā】入冻存管【guǎn】中，再添【tiān】加1〇%DMSO后进行冻存。
 
注意事项：
收【shōu】到细胞后【hòu】，若发现干冰己挥【huī】发干净、冻存管【guǎn】瓶盖脱落、破损【sǔn】及【jí】细胞有污染，请立即与我【wǒ】们电【diàn】联。
所有动【dòng】物细胞均视为有潜在的生物【wù】危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注【zhù】意【yì】防【fáng】护，所【suǒ】有废液【yè】及接触过此细胞【bāo】的【de】器皿需【xū】要灭菌【jun1】后方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：静脉内皮细胞与A549细胞株融合
2)形态：梭形，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装

人脐静脉融合细胞(EA.hy926)运输和保存：使用含有胎牛【niú】血清的【de】2ml冻【dòng】存管发送存活细胞。收【shōu】到【dào】细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心【xīn】5min后，于洁净【jìng】操作台弃【qì】去上清【qīng】，加入推荐使【shǐ】用的培养基后转移【yí】至l〇cm培养皿或者T25培【péi】养瓶中培养，传【chuán】代达【dá】到细【xì】胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操【cāo】作见【jiàn】细【xì】胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。