人胆管癌细胞（HuH28）

人胆管癌细胞(HuH28)
细胞特性：
1)来源：胆管癌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显微【wēi】镜下确【què】认细胞【bāo】生长状态，去掉封口膜【mó】并将T25瓶置于37°C培养约【yuē】2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4. 如果细【xì】胞长满（90%以上）请及时进行细【xì】胞传代，传代培【péi】养用【yòng】6ml本公司附【fù】带的*培养基。
5.接到细胞次日【rì】，请检查细胞是否污【wū】染，若发现污【wū】染或【huò】疑似【sì】污【wū】染，请及时与我们取【qǔ】得【dé】电联。
 
人胆管癌细胞(HuH28)细胞用途：仅供使用。
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备DMEM培养基(DMEM，GIBCO)，90%;北美胎牛血【xuè】清【qīng】，10%。
2.培养条【tiáo】件：气相：空气，95%;二氧【yǎng】化【huà】碳，5%。温度：37°C，培养箱湿度为 70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏【sū】细【xì】胞：将含有lmL细胞悬【xuán】液的冻存管迅速放入37°C水浴中（水面要【yào】低于冻【dòng】存管盖【gài】部）摇晃【huǎng】解【jiě】冻，移入事先准备好的【de】含有4mL培养基的15ml离心管中混合【hé】均匀。在1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃【qì】去【qù】上清液【yè】，加入lmL培养基后匀。然后将所有细胞【bāo】悬液【yè】移【yí】入【rù】含有5ml培养基的培养【yǎng】瓶中培养过【guò】夜【yè】。第二天换液并检查【chá】细【xì】胞【bāo】密度。
细胞传代：如果细胞【bāo】密度达80%-90%，即可进【jìn】行传【chuán】代培养【yǎng】。对于贴壁细胞，传代可参考以下方【fāng】法：弃去【qù】培养上清，用不含钙、镁离【lí】子的PBS润洗细胞9-22次。力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养瓶中，置于37°C培【péi】养箱中消化9-22分钟【zhōng】，然后在显【xiǎn】微【wēi】镜下观察细胞消【xiāo】化情况【kuàng】，若细胞大【dà】部分【fèn】变【biàn】圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下【xià】培养瓶【píng】后加【jiā】入3ml此细胞的【de】培养【yǎng】基终止消化。
轻轻吹打后吸出，移【yí】入15ml离心管中，在【zài】1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟，弃去上清【qīng】液，加【jiā】入lmL培养【yǎng】液后【hòu】吹匀。移入到【dào】事先准备好【hǎo】的【de】含【hán】有5ml培养基的【de】T-25培养瓶中【zhōng】或含有14ml培【péi】养【yǎng】基【jī】的T-75培【péi】养瓶【píng】中培养。细胞冻存：待细胞生长状态良好【hǎo】时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻【dòng】存时，先要消化处理并进行细【xì】胞计数。消化方法按照细胞【bāo】传代方法的9-22步【bù】骤进行，后的重【chóng】悬液【yè】使【shǐ】用血清。悬浮细胞【bāo】直【zhí】接计数后离心，用血清重悬浮，加DMS至【zhì】终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按【àn】每【měi】lml的【de】数量分配到冻存管中。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
 
人胆管癌细胞(HuH28)注意事项：
收到细胞后，若发现干冰己挥发【fā】干净【jìng】、冻【dòng】存管瓶【píng】盖脱【tuō】落、破损【sǔn】及细胞有污染【rǎn】，请立即与我们电联。
所有动物细胞均视为【wéi】有潜在的生物危害性，必须在【zài】二级【jí】生【shēng】物安全【quán】台内【nèi】操作【zuò】，并请【qǐng】注意防护，所有废液及接触过【guò】此【cǐ】细胞的器【qì】皿需要【yào】灭菌后方能丢弃。