人主动脉血管平滑肌细胞 （HA-VSMC）

人主动脉血管平滑肌细胞 (HA-VSMC)
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 F-12K 培【péi】养基（F-12K: GIBCO，添加【jiā】 0.05 mg/ml 抗 坏【huài】血酸，0_01 mg/m丨【shù】胰岛素，0.01 mg/ml转铁蛋白，1，0.03 mg/ml ECGS，10 mM HEPES，10 mM TES，1%P/S;北美胎牛血清【qīng】(United States, GIBCO)，10%。

2. 培养条件【jiàn】：气相【xiàng】：空气，95%;二【èr】氧【yǎng】化碳，5%。温度：37°C，培养【yǎng】箱湿度 为【wéi】 70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将【jiāng】含有lmL细胞悬液的冻存管迅速放入37°C水【shuǐ】浴中（水面【miàn】要低于冻存管【guǎn】盖部）摇【yáo】晃【huǎng】解冻，移入事【shì】先准【zhǔn】备好的含有4mL培养基的15ml离心 管中【zhōng】混合均匀。在1000RPM条件下离【lí】心4分【fèn】钟，弃去上清液【yè】，加入【rù】lmL培 养基后吹匀。然【rán】后将所有【yǒu】细胞悬液移入含有5ml培养基的培【péi】养【yǎng】瓶【píng】中培【péi】养过夜。 第二天换液并检【jiǎn】查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人主动脉血管平滑肌细胞 (HA-VSMC)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清【qīng】，用不【bú】含钙【gài】、镁【měi】离子的PBS润洗细胞9-22次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置于37°C培养箱中消化9-22分钟，然后在显【xiǎn】微镜【jìng】下观察【chá】细胞消化【huà】情况，若细胞大部【bù】 分变【biàn】圆并脱落，迅速拿回操作台【tái】，轻敲几下培养【yǎng】瓶后加入【rù】3ml此细胞的 培养基终止消【xiāo】化。轻轻吹打后吸【xī】出，移入15ml离心管中【zhōng】，在1000RPM条件下【xià】离【lí】心4分钟，弃去上清【qīng】液，加【jiā】入lmL培养液后【hòu】吹【chuī】匀。移【yí】入到事先准备好【hǎo】的【de】含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基【jī】的T-75培【péi】养瓶中培【péi】养【yǎng】。
 
细胞冻【dòng】存：待细胞生长状态良好【hǎo】时【shí】，可进行细胞【bāo】冻存【cún】。贴壁细胞冻存时，先要消【xiāo】化处理并进行细胞【bāo】计数。消化方【fāng】法按照细【xì】胞传代方法的9-22步骤进行，后【hòu】的重【chóng】悬液使用【yòng】血清。悬浮细胞直接计数后离【lí】心【xīn】，用【yòng】血清重【chóng】悬浮，加DMSO至终浓【nóng】度为10%。加入DMSO后迅【xùn】速混匀，按每lml的数量分配到冻【dòng】存管 中。本公【gōng】司按每【měi】个冻存管细胞数目大于1X106个【gè】细胞冻存。
 
注意事项：
收到细胞后，若发【fā】现干冰己挥发干【gàn】净、冻【dòng】存管瓶盖脱【tuō】落、破损及【jí】细胞有污【wū】染，请立即与我们电联【lián】。
所有【yǒu】动物【wù】细胞【bāo】均视【shì】为有潜在的生物【wù】危【wēi】害性，必须在二级生物安全台内【nèi】操作【zuò】，并请注意防护， 
细胞特性：
1)来源：血管平滑肌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人主动脉血管平滑肌细胞 (HA-VSMC)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先【xiān】在【zài】显【xiǎn】微镜下确【què】认细胞生长状态【tài】，去掉【diào】封口膜并将T25瓶置于37°C培养约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细胞【bāo】长满【mǎn】（90%以【yǐ】上）请及时进行细胞【bāo】传【chuán】代，传【chuán】代培【péi】养用6ml本公司附带的*培养基。
5.接到【dào】细胞【bāo】次日，请检查细胞是否污【wū】染，若发现【xiàn】污染或疑似【sì】污染，请及时与我们取得电联【lián】。
细胞用途：仅供使用。