人肺腺癌细胞（HCC-78）

人肺腺癌细胞(HCC-78)
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培【péi】养基(RPMI-1640:GIBCO，90%;胎牛
血清，10%。
2.培养条件：气相：空气，95%;二【èr】氧化碳【tàn】，5%。温度：37°C，培【péi】养箱湿度【dù】为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复【fù】苏【sū】细胞：将含有【yǒu】lmL细胞悬液的冻【dòng】存管【guǎn】迅速放入37°C水浴中（水面要低于冻存管盖部【bù】）摇晃【huǎng】解冻，移入事先【xiān】准备好的含有4mL培养基【jī】的15ml离心管中混【hún】合均匀。在【zài】1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟，弃去上清液，加【jiā】入lmL培养基后吹匀。然【rán】后【hòu】将所有细胞悬液【yè】移入含有5ml培养基的【de】培养瓶【píng】中培养过夜。 第二天换液并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

人肺腺癌细胞(HCC-78) 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培【péi】养【yǎng】上清，用不含钙、镁离子的【de】PBS润洗【xǐ】细胞9-22次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶中，置于37°C培养箱中消化9-22分钟，然【rán】后在显微镜下【xià】观察【chá】细【xì】胞消化情况【kuàng】，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操【cāo】作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此【cǐ】细胞的 培养【yǎng】基终止消化。轻轻吹打后吸出，移【yí】入15ml离心管中，在【zài】1000RPM条【tiáo】件下离【lí】心4分【fèn】钟， 弃去【qù】上清液，加入【rù】lmL培【péi】养液后吹匀【yún】。移入到事先准备好的【de】含有5ml培养基的T-25培养瓶【píng】中【zhōng】或【huò】含有14ml培养基的T-75培【péi】养瓶【píng】中培养。
 
细胞【bāo】冻存：待细胞生长【zhǎng】状【zhuàng】态良好【hǎo】时，可进行细【xì】胞【bāo】冻存。贴壁细胞冻存时，先要消化处理并进行细胞【bāo】计数。消【xiāo】化方法按照细胞【bāo】传代方法的9-22步【bù】骤进行，后的重悬液使用血【xuè】清。悬浮细胞直接计数【shù】后【hòu】离心【xīn】，用血清【qīng】重悬【xuán】浮，加DMSO至终【zhōng】浓度为10%。加入DMSO后【hòu】迅【xùn】速混匀，按每lml的数【shù】量分【fèn】配【pèi】到冻存管中。本公【gōng】司按每个冻存【cún】管细胞数目大【dà】于1X106个细胞【bāo】冻存。
 
注意事项：
收到细胞后，若发【fā】现干冰己【jǐ】挥【huī】发干净、冻【dòng】存管瓶盖脱落、破损及细胞有污【wū】染，请立【lì】即【jí】与我们电联【lián】。
所有动物细胞均视为有【yǒu】潜【qián】在的【de】生物危害性【xìng】，必须【xū】在二【èr】级生物【wù】安全台内操作，并请注意防护【hù】，所有废液及接触过此细胞的器【qì】皿需要灭菌后方能【néng】丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：肺腺癌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人肺腺癌细胞(HCC-78)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先【xiān】在显微镜下确认【rèn】细【xì】胞生长状【zhuàng】态，去掉封口膜并将T25瓶置于【yú】37°C培养约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4. 如果细胞长满（90%以上）请及时进行细【xì】胞传代【dài】，传【chuán】代培养用6ml本【běn】公【gōng】司附带的*培养基。
5.接到【dào】细【xì】胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污【wū】染或【huò】疑似污染【rǎn】，请及时【shí】与我们取【qǔ】得电【diàn】联。
细胞用途：仅供使用。