人结肠癌氟尿嚼陡耐药株 （HCT-8/FU）

人结肠癌氟尿嚼陡耐药株 (HCT-8/FU)
细胞介绍：
这是一株耐药细胞株。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
注意：客户收【shōu】到细【xì】胞【bāo】后按照下面【miàn】的要求操作：培养瓶里面的培养液是不【bú】含药物的。待细胞长到【dào】9-22%的【de】汇合度时，去掉培【péi】养【yǎng】液，加【jiā】入含8000ng/mlFU药物的培养液，放入培【péi】养箱【xiāng】，这段时间肯【kěn】定会有小【xiǎo】部分细胞悬浮起【qǐ】来【lái】，但【dàn】是不要【yào】紧， 通过换【huàn】液【yè】可以去掉，下面的细【xì】胞待长满就可【kě】以【yǐ】消化传瓶了，这时可以一直用含 药培养液来【lái】消化培养细胞，一两代之后可【kě】以【yǐ】将药物【wù】浓度提髙【gāo】到15000ng/ml,含 药培养【yǎng】液用于细【xì】胞培【péi】养都没问题的，冻存的时候【hòu】就不要在【zài】冻存液里面【miàn】加【jiā】药物了。
1.准备 RPIVM-1640 培【péi】养基(RPMI-1640:GIBCO,添加 NaHC031.5g八, D-葡萄糖【táng】2.5g八，丙酮酸钠O.llg八)，90%;胎牛血【xuè】清，10%，添加1%双 抗，15000ng/ml氟尿喃啶。
2.培养条件：气相：空气【qì】，95%;二氧【yǎng】化碳，5%。温度【dù】：37摄氏度，培养箱 湿度【dù】为70%-80%。
3. 冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用现【xiàn】配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将含有【yǒu】lmL细胞悬【xuán】液的冻【dòng】存管在【zài】37°C水浴【yù】中迅速摇晃解【jiě】冻，加 入4mL培【péi】养基混合【hé】均匀【yún】。在1000RPM条件下离【lí】心4分钟，弃【qì】去上清液，补加l-2mL培养【yǎng】基后吹匀。然后将所有细胞悬【xuán】液【yè】加【jiā】入【rù】培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入l〇cm皿【mǐn】中，加入约8ml培养基，培【péi】养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人结肠癌氟尿嚼陡耐药株 (HCT-8/FU)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培【péi】养【yǎng】上清【qīng】，用【yòng】不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-22次【cì】。力口2m丨消化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中【zhōng】消化9-22分【fèn】钟，然后在显【xiǎn】微【wēi】镜下观察细【xì】胞消化情况，若细胞大部 分变圆【yuán】并【bìng】脱落，迅速【sù】拿回操【cāo】作台，轻敲几下培养瓶后加【jiā】少量培养基终止消化【huà】。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下【xià】离心4分【fèn】钟，弃去【qù】上清液【yè】，补加l-2mL培养【yǎng】液后吹【chuī】匀【yún】。将细胞悬液按1: 2到【dào】1: 5的比例分到新的含8ml培养基的新皿【mǐn】中或者【zhě】瓶中。
 
细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻【dòng】存。贴壁【bì】细胞冻存时，弃去培【péi】养基后加【jiā】入少【shǎo】量胰酶，细胞变圆脱落【luò】后，加入约lml含血清的培【péi】养【yǎng】基后加【jiā】入冻存管中，再添【tiān】加【jiā】1〇%DMSO后【hòu】进行【háng】冻【dòng】存。
 
注意事项：
收到细胞后，若【ruò】发【fā】现【xiàn】干冰己挥发干净、冻【dòng】存管瓶盖脱落、破损及细胞有【yǒu】污【wū】染，请立即与【yǔ】我【wǒ】们电联。
所有【yǒu】动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级【jí】生物【wù】安全【quán】台内操作，并【bìng】请注【zhù】意防护【hù】，所【suǒ】有【yǒu】废液及接【jiē】触过此【cǐ】细胞的器皿需要【yào】灭菌后方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：人结肠癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人结肠癌氟尿嚼陡耐药株 (HCT-8/FU)运【yùn】输和【hé】保存【cún】：可【kě】选择干冰运输【shū】及发送复苏存活【huó】细胞方式：（1)干冰运输，收到后 立即转入液氮冻存【cún】或直【zhí】接复【fù】苏；（2)存活细胞，收到后应继续生【shēng】长，传代达到细胞生【shēng】长状态良好【hǎo】时【shí】，再进【jìn】行冻存。具体操作见细胞【bāo】培养步骤。
细胞用途：仅供使用。