人结肠癌紫杉醇耐药株 （HCT-8/Taxol）

人结肠癌紫杉醇耐药株 (HCT-8/Taxol)
细胞介绍：
这是一株耐药细胞株。
 胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
注意【yì】：客户收到细胞后按照下面的【de】要求操作：培养瓶里面的培养液是不含药物的。待【dài】细胞长到【dào】9-22%的【de】汇合度时，去掉培养液，加入含500ng/mlTaxo丨药物 的【de】培【péi】养液【yè】，放【fàng】入培【péi】养箱，这【zhè】段时间【jiān】肯定会【huì】有小部分细胞悬浮起【qǐ】来，但【dàn】是【shì】不要紧， 通过换液可以【yǐ】去掉【diào】，下面【miàn】的细胞【bāo】待【dài】长满就可【kě】以消化传瓶了【le】，这【zhè】时【shí】可以一直用含 药培养液【yè】来【lái】消化培养细胞，一两代之后可以【yǐ】将药物浓度【dù】提髙到l〇〇〇ng/ml，含 药培养【yǎng】液用于细胞培【péi】养都没问题的，冻存的【de】时候就【jiù】不要【yào】在冻存【cún】液【yè】里面加药物了。
1.准【zhǔn】备 RPIVM-1640 培养【yǎng】基【jī】(RPMI-1640:GIBCO,添加 NaHC031.5g八, D-葡萄糖2.5g八，丙酮酸钠【nà】O.llg八【bā】)，90%;胎牛血清，10%，添加PS，1%, Taxol000ng/ml〇
2.培养【yǎng】条件：气【qì】相【xiàng】：空气，95%;二氧化【huà】碳，5%。温【wēn】度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用现配【pèi】。液氮储【chǔ】存【cún】。
 
2)细胞处理：
复【fù】苏细胞【bāo】：将含有lmL细胞【bāo】悬【xuán】液的冻存管在37°C水浴【yù】中迅速摇晃解【jiě】冻，加入4mL培养基混【hún】合【hé】均匀。在1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟，弃去上清液，补 加l-2mL培养基后【hòu】吹【chuī】匀【yún】。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将【jiāng】细【xì】胞悬液加入l〇cm皿【mǐn】中，加入约8ml培【péi】养基，培【péi】养【yǎng】过夜【yè】）。第【dì】二天换液并检查细【xì】胞密度【dù】。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人结肠癌紫杉醇耐药株 (HCT-8/Taxol)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃【qì】去【qù】培养上清【qīng】，用不含【hán】钙、镁离子的PBS润洗细胞9-22次【cì】。力口2m丨消化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中消化9-22分【fèn】钟，然后在【zài】显【xiǎn】微镜下观察细胞消化情况【kuàng】，若细胞大【dà】部【bù】分【fèn】变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲【qiāo】几下培养【yǎng】瓶后【hòu】加【jiā】少量【liàng】培【péi】养基终止消化。按【àn】6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心【xīn】4分钟，弃去上清【qīng】液【yè】，补加l-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1: 2到1: 5的【de】比例分【fèn】到新的含8ml培养基的新皿【mǐn】中或【huò】者【zhě】瓶中。
 
3)细胞冻存：待细胞生长状【zhuàng】态【tài】良【liáng】好时，可【kě】进【jìn】行细【xì】胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃 去培养基后加入【rù】少量胰酶，细胞变圆脱落后，加【jiā】入【rù】约lml含血【xuè】清的培养基后 加入冻存【cún】管【guǎn】中，再添加1〇%DMSO后进行冻【dòng】存。
 
注意事项：
收到细【xì】胞后【hòu】，若发现【xiàn】干冰己【jǐ】挥【huī】发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细【xì】胞有污染，请【qǐng】立即与【yǔ】我们电联。
所有动【dòng】物细胞均视为有潜在的【de】生物危【wēi】害性，必【bì】须【xū】在二级生物【wù】安全台【tái】内操作，并请注意防护【hù】，所有废液及接触【chù】过此细胞的器【qì】皿需要灭菌【jun1】后方能【néng】丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：人结肠癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人结肠癌紫杉醇耐药株 (HCT-8/Taxol)运输和保存【cún】：可选择【zé】干冰【bīng】运输【shū】及【jí】发送复【fù】苏存【cún】活细【xì】胞方式【shì】：（1)干【gàn】冰运输，收到后立即转入液【yè】氮冻存【cún】或【huò】直接复苏；（2)存【cún】活【huó】细胞，收到后【hòu】应继续生长，传代达到细胞【bāo】生长状态良好时，再进行【háng】冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。